靶向增殖细胞核抗原shRNA的构建及其对HepG2细胞增殖与凋亡的影响

作     者：张小鹰 吴风云 何金花 廖晓莉 王威 蒋建伟 

作者机构：暨南大学医学院生化教研室广州510630 广东省佛山市南海区妇幼保健院检验科佛山528200 浙江省温州市平阳县人民医院温州325400 广东省广州市番禺区中心医院检验科番禺511440 

基　　金：广东省科技计划(2009B080701051) 广东省医学科研基金(A2007322)资助项目 

出 版 物：《生物化学与生物物理进展》 (Progress In Biochemistry and Biophysics)

年 卷 期：2010年第37卷第3期

页      码：278-287页

摘      要：为了探讨抑制增殖细胞核抗原(PCNA)基因表达对人肝癌HepG2细胞增殖及凋亡的影响,将前期筛选出的最佳siRNA序列转化为能表达其小发夹结构RNA(smallhairpinRNAs,shRNA)的DNA序列,并与pSilencer2.0-U6质粒定向连接,构建靶向PCNA基因的siRNA真核表达载体pShPCNA,经DNA测序证实与设计完全一致.随后采用WST法及克隆形成抑制观察细胞增殖抑制情况、划痕实验来观察细胞迁移能力,流式细胞术、Hoechest33258染色、细胞线粒体膜电位改变检测细胞凋亡.在转染HepG2细胞48h后,pShPCNA组细胞PCNAmRNA表达明显下调,并出现明显的增殖抑制作用,明显抑制细胞克隆的形成和细胞的迁移力,且呈剂量-效应关系.流式细胞术检测发现:pShPCNA组细胞明显阻滞于G0/G1期,并出现明显的亚二倍体凋亡峰,出现明显的早期凋亡细胞群.荧光显微镜检测表明,细胞线粒体膜电位降低,并且细胞出现核固缩、凋亡小体等凋亡形态学变化.上述结果表明,成功构建了靶向PCNA基因的siRNA真核表达载体pShPCNA,pShPCNA转染HepG2细胞48h后,能够显著抑制细胞的生长增殖、诱导细胞凋亡、细胞周期阻滞于G0/G1期.

主 题 词：RNA干扰 增殖细胞核抗原 真核细胞表达载体 HepG2细胞 肝癌 

学科分类：1002[医学-临床医学类] 100214[100214] 10[医学] 

核心收录：

D　O　I：10.3724/sp.j.1206.2009.00573

馆 藏 号：203122543...