烟草花叶病毒实时荧光定量PCR检测体系的构建

作     者：吴彦辉 蒲团卫 张生杰 牛龙龙 白静科 李成军 李建华 WU Yan-hui;PU Tuan-wei;ZHANG Sheng-jie

作者机构：河南省烟草公司许昌市公司河南许昌461000 河南省农业科学院烟草研究所/烟草行业黄淮烟区烟草病虫害绿色防控重点实验室河南许昌461000 

基　　金：许昌市烟草公司科技项目(2021411000240104) 

出 版 物：《安徽农业科学》 (Journal of Anhui Agricultural Sciences)

年 卷 期：2023年第51卷第12期

页      码：171-175页

摘      要：[目的]防止隐症携带烟草花叶病毒(TMV)的烟苗移栽到大田造成产量损失。[方法]根据TMV的外壳蛋白(coat protein,CP)基因保守序列设计引物及探针,通过绘制标准曲线、重复性、特异性及灵敏性分析,建立了一种TMV的TaqMan-qPCR检测方法。[结果]该方法特异性好,与其他常见的烟草病毒无交叉反应;灵敏度高,检测下限可达到4.53×10^(1) copies/μL,比常规RT-PCR检测灵敏度提高了10倍;建立的标准曲线斜率为-3.299,决定系数(R^(2))为0.9933,扩增效率为100.97%,且循环阈值(Ct)与质粒标准品浓度之间线性关系良好,重复性试验结果可靠。[结论]利用建立的TaqMan-qPCR检测方法与常规RT-PCR检测方法同时检测烟苗样品,检测结果一致,进一步验证了荧光定量PCR方法的可靠性。

主 题 词：烟草花叶病毒 实时荧光定量PCR TaqMan探针法 

学科分类：09[农学] 0904[农学-动物医学类] 090401[090401] 090402[090402] 

D　O　I：10.3969/j.issn.0517-6611.2023.12.039

馆 藏 号：203122569...