乙型脑炎病毒E基因Ⅰ、Ⅱ抗原域片段的克隆与原核表达

作     者：冯若飞 李向茸 韦鹏建 樊得英 李明生 乔自林 马忠仁 

作者机构：西北民族大学生物工程与技术国家民委重点实验室甘肃兰州730030 甘肃省动物细胞工程技术研究中心甘肃兰州730030 

基　　金：甘肃省中青年科技基金计划项目(0806RJYA008) 

出 版 物：《西北民族大学学报（自然科学版）》 (Journal of Northwest Minzu University(Natural Science))

年 卷 期：2011年第32卷第1期

页      码：68-72页

摘      要：根据Genebank公布的乙型脑炎病毒E蛋白基因的序列设计并合成一对特异性引物,以pMD18-T-JEV-E质粒为模板,通过PCR扩增E蛋白抗原Ⅰ、Ⅱ基因片段,所得基因纯化后与PGEX-4T-1同时双酶切并重组构建PGEX-JEV-E12质粒,经过测序确定插入编码框正确后经异丙基巯基半乳糖(IPTG)诱导,观察不同诱导时间、不同IPTG浓度对表达的影响,优化反应条件,对表达产物进行SDS-PAGE电泳和蛋白免疫印迹进行分析.结果通过测序证明重组质粒正确插入读码框成功,转化至感受态细胞中以包涵体形式表达,37℃时最佳诱导条件的反应条件为IPTG浓度0.6mmol/L,诱导时间为8 h;蛋白免疫印迹显示,重组表达蛋白和单抗、多抗均能进行中和反应,无非特异性表达.表明表达蛋白具有良好的抗原性,为进一步进行分析E蛋白基因结构与功能的关系、研制新型ELISA诊断试剂和开发基因工程疫苗奠定了基础.

主 题 词：乙型脑炎病毒 E蛋白基因 抗原域 克隆 表达 

学科分类：0710[理学-生物科学类] 071010[071010] 081704[081704] 07[理学] 08[工学] 0817[工学-轻工类] 

D　O　I：10.3969/j.issn.1009-2102.2011.01.015

馆 藏 号：203122590...