基于荧光重组酶聚合酶扩增技术快速检测美洲钩虫方法研究

作     者：梁家瑞 徐斌 胡薇 李梦茹 杨硕 郑彬 LIANG Jiarui;XU Bin;HU Wei;LI Mengru;YANG Shuo;ZHENG Bin

作者机构：中国疾病预防控制中心寄生虫病预防控制所(国家热带病研究中心)国家卫生健康委员会寄生虫病原与媒介生物学重点实验室世界卫生组织热带病合作中心国家级热带病国际联合研究中心上海200025 上海交通大学医学院-国家热带病研究中心全球健康学院上海200025 

基　　金：国家科技重大专项(No.2018ZX10734404) 

出 版 物：《中国热带医学》 (China Tropical Medicine)

年 卷 期：2023年第23卷第7期

页      码：681-685页

摘      要：目的 建立基于荧光重组酶聚合酶核酸扩增(recombinase polymerase amplification, RPA)技术快速检测粪样中美洲钩虫卵的方法,并评价其效能,为快速检测粪样中美洲钩虫卵提供技术支撑。方法 根据美洲钩虫的cox1基因序列设计荧光RPA引物及探针并进行筛选,建立荧光RPA检测方法。将美洲钩虫卵基因组DNA稀释至100 pg/μL、10 pg/μL、1 pg/μL、100 fg/μL、10 fg/μL、1 fg/μL、0.1 fg/μL等7个浓度梯度以测定荧光RPA法的最低检出值,利用荧光RPA法检测日本血吸虫、蛔虫、华支睾吸虫、肝片形吸虫DNA样本进行交叉反应实验。采集44例人粪样并进行DNA提取,运用改良加藤厚涂片法(Kato-Katz)、半巢式PCR法、荧光RPA法同时检测,评价荧光RPA法的灵敏度和特异度。结果 建立的荧光RPA法可在20 min内特异性扩增出美洲钩虫cox1基因长度为194 bp的片段,最低检出值为10 fg/μL,与日本血吸虫、蛔虫、华支睾吸虫、肝片形吸虫均无交叉反应。通过对44份人粪便样本进行检测,Kato-Katz法和半巢式PCR法均检出26例阳性样本,荧光RPA法检出27例阳性样本,其中1号样本荧光曲线在反应后期略高于阴性对照,但未出现与阳性对照相似反应趋势,因此判定为疑似阴性样本。荧光RPA法与Kato-Katz法和半巢式PCR法相比,其灵敏度均为100.00%,特异度均为94.44%,检测结果一致性较好(Kappa=0.953>0.75)。结论 荧光RPA法可在短时间内实现对美洲钩虫高效、敏感、特异的检测,有望应用于美洲钩虫感染的监测及预警。

主 题 词：美洲钩虫 重组酶聚合酶扩增技术 cox1基因 改良加藤厚涂片法 半巢式PCR法 

学科分类：1001[医学-基础医学] 100103[100103] 10[医学] 

D　O　I：10.13604/j.cnki.46-1064/r.2023.07.01

馆 藏 号：203122618...