朱顶红褪绿环斑病毒RT-LAMP快速检测体系的建立

作     者：赵正婷 盖晓彤 张俊蕾 夏振远 姜宁 刘雅婷 ZHAO Zhengting;GE Xiaotong;ZHANG Junlei;XIA Zhenyuan;JIANG Ning;LIU Yating

作者机构：云南农业大学农学与生物技术学院昆明650201 云南省烟草农业科学研究院昆明650021 云南农业大学植物保护学院昆明650201 云南农业大学烟草学院昆明650201 

基　　金：国家自然科学基金项目(32260681) 云南省烟草公司科技计划项目(2021530000242031) 云南省科技厅基础研究专项(202101AU070129) 云南省教育厅科学研究基金项目(2022Y234) 

出 版 物：《中国烟草科学》 (Chinese Tobacco Science)

年 卷 期：2023年第44卷第3期

页      码：39-46页

摘      要：为快速检测朱顶红褪绿环斑病毒(hippeastrum chlorotic ringspot virus, HCRV),根据HCRV的核壳体(N)蛋白基因保守核苷酸序列,设计了5组引物进行筛选,并采用单一变量法对RT-LAMP体系反应温度、时间、甜菜碱浓度、dNTPs浓度、Mg2+浓度、内外引物浓度比等进行逐一优化,建立了HCRV逆转录环介导等温扩增(RT-LAMP)检测体系。结果表明,最佳引物组为P1,最适反应温度为64℃,Betaine、dNTPs、Mg2+的最佳终浓度分别为0.8、0.2、6 mmol/L,最佳内外引物浓度比为5∶1,最佳反应时间50 min。检测结果显示优化后的RT-LAMP经SYBR Green I染色可通过肉眼直接判断结果,具有高度特异性,且灵敏度是常规RT-PCR的100倍。本研究为HCRV的检测提供了一种便捷、高效、可靠的方法。

主 题 词：朱顶红褪绿环斑病毒 RT-LAMP 特异性 灵敏度 

学科分类：09[农学] 0904[农学-动物医学类] 090401[090401] 090402[090402] 

D　O　I：10.13496/j.issn.1007-5119.2023.03.006

馆 藏 号：203122711...