阪崎克罗诺杆菌TaqMan-MGB探针实时荧光PCR快速检测技术研究

作     者：黄焘 周蒂 王莉萍 

作者机构：浙江贝因美科工贸股份有限公司浙江310053 温州医学院仁济学院浙江325035 

出 版 物：《环境与职业医学》 (Journal of Environmental and Occupational Medicine)

年 卷 期：2013年第30卷第11期

页      码：875-879页

摘      要：[目的]建立阪崎克罗诺杆菌TaqMan-MGB探针实时荧光定量聚合酶链反应(RT-PCR)快速检测方法。[方法]在阪崎克罗诺杆菌保守序列设计一对特异性引物和TaqMan-MGB探针,通过对PCR反应条件和扩增体系的优化,建立阪崎克罗诺杆菌TaqMan-MGB探针实时荧光PCR检测方法 ;用已知浓度的阪崎克罗诺杆菌验证其敏感性;用阪崎克罗诺杆菌、大肠埃希菌、鸭沙门菌株、柠檬酸杆菌等菌株验证其特异性;用婴幼儿配方粉等食品开展TaqMan-MGB探针实时荧光PCR技术与常规检测方法符合性比较。[结果]本研究建立的阪崎克罗诺杆菌实时荧光PCR检测技术,反应循环(cycle threshold,CT)值与模板浓度的对数值具有良好的对应关系[=-3.06×log(X)+36.63,R2=0.999],最低检测浓度为100CFU/mL,经36℃增菌8h最低检测限可达1CFU/mL,敏感性较普通TaqMan探针高10倍;11株阪崎克罗诺杆菌CT值均小于30,而大肠埃希菌、鲍曼不动杆菌、柠檬酸杆菌等30株菌株CT值大于30或扩增曲线成一平滑直线;隔天连续5次反应CT值变异系数小于5%;140件不同批次不同婴幼儿配方粉、192件婴幼儿谷物辅助食品检测结果与常规分离培养比较,差异无统计学意义(χ2=0.624,P>0.05)。[结论]阪崎克罗诺杆菌TaqMan-MGB探针实时荧光PCR快速检测技术具有特异性强、敏感性高、易操作等优点,适用于婴儿配方粉等食品开展阪崎克罗诺杆菌快速检测与监测工作。

主 题 词：阪崎克罗诺杆菌 实时荧光PCR TaqMan—MGB探针 

学科分类：12[管理学] 1204[管理学-公共管理类] 120402[120402] 1004[医学-公共卫生预防医学类] 10[医学] 

D　O　I：10.13213/j.cnki.jeom.2013.11.023

馆 藏 号：203122712...