交叉引物恒温扩增技术快速检测结核分枝杆菌复合群和非结核分枝杆菌系统的建立

作     者：黄文滨 陈丽萍 张望 肖婷 张满娥 吴定昌 Huang Wenbin;Chen Liping;Zhang Wang;Xiao Ting;Zhang Mane;Wu Dingchang

作者机构：福建医科大学附属龙岩第一医院检验科龙岩364000 福建省龙岩市第二医院分子生物实验室龙岩364000 杭州优思达生物技术有限公司杭州310053 

基　　金：福建省检验医学研究会与国家(福建)基因检测技术应用示范中心联合研创课题(2023LHYC029) 

出 版 物：《中国防痨杂志》 (Chinese Journal of Antituberculosis)

年 卷 期：2023年第45卷第8期

页      码：734-743页

摘      要：目的:建立一种快速检测结核分枝杆菌复合群(MTBC)和非结核分枝杆菌(NTM)的分子交叉引物恒温扩增技术(CPA)检测系统。方法:针对分枝杆菌高度保守的16S rRNA基因序列设计6套CPA引物和3个探针。以含16S rRNA基因序列质粒(浓度为1000拷贝/μl)为阳性模板,筛选确立最佳引物探针组合,并对建立的最佳反应体系进行敏感度、特异度和包容性分析。收集福建省龙岩市第二医院2022年2月8日至2023年3月14日具有肺结核症状或体征的125例疑似肺结核患者的标本,采用分枝杆菌核酸检测试剂盒(PCR-荧光探针法)和建立的CPA法对收集到的标本进行检测,并对两种方法间的检测结果一致性进行统计分析,采用Kappa值评估。Kappa值≥0.75,说明一致性好。结果:筛选出MTBC/NTM-16S-6引物和MTBC/NTM-16S-LR-FAM-3为分枝杆菌检测系统最佳引物探针组合,检测体系最低检测限为100拷贝/μl,检测时间为40 min,能检出MTBC和临床常见NTM,且与常见呼吸道细菌无交叉反应。与实时荧光定量PCR(RT-PCR)检测方法相比,阳性预测值为95.65%(66/69),阴性预测值为85.71%(48/56),符合率为91.20%(114/125),Kappa值为0.82。结论:成功建立了一种基于CPA技术的快速检测MTBC和NTM的检测系统,能够为基层医院结核病疫情防控提供一种新的检测方法。

主 题 词：核酸扩增技术 分枝杆菌,结核 分枝杆菌,非典型 

学科分类：1007[医学-药学类] 100705[100705] 1001[医学-基础医学] 100103[100103] 10[医学] 

D　O　I：10.19982/j.issn.1000-6621.20230088

馆 藏 号：203122713...