实时定量PCR检测肺炎支原体2063位点点突变的方法学研究

作     者：李静宜 孙岚 秦选光 董艳青 姜越 李丹 田秀君 辛德莉 

作者机构：首都医科大学附属北京友谊医院北京热带医学研究所北京市100050 首都医科大学附属北京朝阳医院儿科 

基　　金：首都医科大学基础-临床科研合作基金项目:“肺炎支原体和耐药肺炎支原体诊断新技术研究”(12JL05) 

出 版 物：《中国全科医学》 (Chinese General Practice)

年 卷 期：2013年第16卷第32期

页      码：3774-3777页

摘      要：背景肺炎支原体(MP)是儿童社区获得性肺炎的主要病原体,对目前常用治疗药物——大环内酯类抗生素的耐药率有升高趋势,而传统检测MP耐药株的方法耗时耗力。目的建立一种快速诊断MP感染及耐药表型的新方法。方法采用实时荧光定量PCR技术,以23S rRNA为靶序列,设计不同基因型探针及引物,构建阳性质粒,建立标准曲线。结果实时荧光定量PCR检测敏感2063A质粒和耐药2063G质粒的下限分别为6和60拷贝数,特异性实验结果显示,仅生殖支原体出现扩增。与23S rRNA巢式PCR测序结果相比,实时荧光定量PCR鉴定43株MP临床分离株2063位点等位基因的灵敏度、特异度、阳性预测值、阴性预测值均为100%。12份鼻咽拭子标本实时荧光定量PCR MP阳性检出率为10/12,耐药率为4/12,1份标本同时发现2063A和2063G位点。结论本研究初步建立了一种快速诊断MP感染并判断其耐药基因型的实时荧光定量PCR方法,具有较高的灵敏度。

主 题 词：支原体,肺炎 大环内酯类 抗药性,微生物 聚合酶链反应 点突变 

学科分类：1007[医学-药学类] 100705[100705] 1002[医学-临床医学类] 1001[医学-基础医学] 100103[100103] 100202[100202] 10[医学] 

D　O　I：10.3969/j.issn.1007-9572.2013.32.004

馆 藏 号：203122715...