基于双启动引物特异性检测单核细胞增生李斯特氏菌的PCR方法

作     者：徐义刚 李丹丹 张柏棋 刘忠梅 魏冬旭 刘新亮 李苏龙 XU Yi-gang;LI Dan-dan;ZHANG Bai-qi;LIU Zhong-mei;WEI Dong-xu;LIU Xin-liang;LI Su-long

作者机构：黑龙江出入境检验检疫局检验检疫技术中心黑龙江哈尔滨150001 海南出入境检验检疫局检验检疫技术中心海南海口570125 辽宁出入境检验检疫局辽宁大连116001 

基　　金：国家质检总局科技计划项目(2012IK157) 质检公益性行业科研专项(201310126) 

出 版 物：《食品工业科技》 (Science and Technology of Food Industry)

年 卷 期：2014年第35卷第10期

页      码：86-89页

摘      要：以单核细胞增生李斯特氏菌iap基因为靶基因，利用一新型PCR引物设计方法——双启动引物（Dual-primingoligonucleotide，DPO），建立了特异性检测单核细胞增生李斯特氏菌的DPO—PCR方法，测试了DPO—PCR方法退火温度不敏感性、特异性及灵敏度，并在实践检测中进行了初步应用。结果显示：该方法检测单核细胞增生李斯特氏菌的灵敏度为1．51×10^2CFU／mL；退火温度不敏感性测试中，与常规PCR引物相比，DPO引物在48～68℃退火温度范围内均能够高效率地扩增靶基因；特异性测试中，DPO—PCR方法能特异地检测出目标菌，与其他菌株无非特异性扩增反应，比常规PCR方法显示出更强的特异性。实践应用证明，利用DPO—PCR方法对130份样本进行检测，共计检出9份单核细胞增生李斯特氏菌阳性样本，经国标法（GB／T4789．30—2008）复检，两者检测结果一致，显示出良好的实用性，为单核细胞增生李斯特氏菌的快速准确检测提供了新方法。

主 题 词：单核细胞增生李斯特氏菌 iap基因 DPO-PCR方法 

学科分类：09[农学] 0903[农学-动物生产类] 

核心收录：

D　O　I：10.13386/j.issn1002-0306.2014.10.010

馆 藏 号：203122731...