11种常见支原体环介导等温扩增检测方法的建立及验证

作     者：柯晓梅 吴宇曼 孔伟圣 陈智妍 刘帅 吴华佐 朱霞燕 张健 KE Xiaomei;WU Yuman;KONG Weisheng;CHEN Zhiyan;LIU Shuai;WU Huazuo;ZHU Xiayan;ZHANG Jian

作者机构：遵义医科大学珠海校区生物工程系广东珠海519041 珠海贝索细胞科学技术有限公司广东珠海519000 

基　　金：贵州省科技支撑计划(黔科合支撑2758号) 贵州省基础研究计划(黔科合基础-ZK一般620) 

出 版 物：《中国生物制品学杂志》 (Chinese Journal of Biologicals)

年 卷 期：2023年第36卷第8期

页      码：980-986页

摘      要：目的 建立一种用于同时检测多种支原体污染的环介导等温扩增(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)法,并进行验证。方法 通过SnapGene软件的多序列比对工具比对13种支原体16S rRNA基因的保守序列,根据保守序列设计2条内引物FIP和BIP、2条外引物F3和B3、环引物LOOP(LF/LB);建立LAMP体系:Bst DNA聚合酶大片段(8 U/μL)、10×ThermoPoly反应缓冲液[20 mmol/L Tris-HCl,10 mmol/L KCl,10 mmol/L(H4)2SO4,2 mmol/L MgSO4,0.1%Triton X-100,pH 8.8]、MgSO4(100 mmol/L)、dNTP Mix、FIP/BIP Primers、F3/B3 Primers、LOOP Primers、无核酸酶水、模板DNA(13种搭载支原体16S rRNA的质粒)。产物进行1%琼脂糖凝胶电泳鉴定。验证方法可行性、特异性、可重复性,确定方法检测限。结果 筛选的2组LAMP引物,组合使用可同时检测出11种支原体序列;在其他非特异模板检测中未出现非特异扩增,引物组特异性良好;建立的方法灵敏度好,最低检测限为30.1 copies/μL,且重复性好,未见假阳性和假阴性扩增。结论 LAMP技术可用于检测细胞培养中多种支原体污染的情况,特异性好、耗时短,可作为细胞培养中快速检测支原体污染的技术平台之一。

主 题 词：环介导等温扩增 支原体 16S rRNA 

学科分类：0710[理学-生物科学类] 1007[医学-药学类] 100705[100705] 07[理学] 071005[071005] 10[医学] 

D　O　I：10.13200/j.cnki.cjb.003968

馆 藏 号：203122874...