抗PDL1-CAR慢病毒载体的构建及其转染培养体系的优化

作     者：彭群艺 李纯团 郑艳 朱雄鹏 Peng Qunyi;Li Chuntuan;Zheng Yan;Zhu Xiongpeng

作者机构：福建医科大学附属泉州市第一医院血液科福建泉州362000 

基　　金：福建省自然科技基金资助项目(编号:2021J011397) 泉州市科技计划项目(编号:2022NS053) 

出 版 物：《肿瘤预防与治疗》 (Journal of Cancer Control And Treatment)

年 卷 期：2023年第36卷第7期

页      码：550-556页

摘      要：目的:设计构建抗PDL1-CAR慢病毒载体,分析嵌合抗原受体T(chimeric antigen recptor T, CART)细胞的结构和功能,同时优化CART细胞的转染和培养,增加CART细胞的表达率和杀伤活性。方法:构建靶向程序性死亡配体1(programmed death-ligand1,PDL1)的CAR慢病毒载体,按病毒感染复数(multiplicity of infection, MOI)=10、20、40的条件进行转染,采用非磁珠法进行培养扩增,荧光显微镜和流式细胞仪检测转染后CART细胞的表达,最后采用流式绝对计数法检测CART细胞的杀伤性。结果:采用GV401质粒构建的抗PDL1-CAR慢病毒载体,经培养扩增后3组MOI的CART细胞阳性表达率分别为28.80%±0.46%、54.77%±0.32%、71.37%±0.42%,并在荧光显微镜下观察到抗PDL1-CAR细胞表达绿色荧光。在效靶比为2:1、5:1和10:1时,抗PDL1-CAR细胞比T细胞对PDL1-CA46细胞的杀伤率更高(Z=-1.964, P <0.05)。结论:构建抗PDL1-CAR慢病毒载体,可以为其他各种CART细胞的构建提供良好参考,CART细胞的表达率和杀伤活性的提高,为CART细胞的功能研究奠定基础。

主 题 词：CART 细胞 PD-L1 转染 培养 

学科分类：1001[医学-基础医学] 100102[100102] 10[医学] 

D　O　I：10.3969/j.issn.1674-0904.2023.07.002

馆 藏 号：203123084...