实时荧光多酶恒温扩增技术检测小鼠细小病毒核酸的方法建立

作     者：尤金炜 陈慧 马畅 张旭亮 董敏 杨阳 恽时锋 YOU Jingwei;CHEN Hui;MA Chang;ZHANG Xuliang;DONG Min;YANG Yang;YUN Shifeng

作者机构：南京大学医学院附属金陵医院(东部战区总医院)实验动物室南京210002 南京大学医学院附属金陵医院(东部战区总医院)检验科南京210002 南京市第二医院精准医学中心南京210003 

基　　金：军队实验动物专项科研课题(SYDW-17) 中国博士后科学基金新冠肺炎疫情防控专项资助(2020M670092ZX) 江苏省卫健委科研项目(M2020029) 

出 版 物：《东南国防医药》 (Military Medical Journal of Southeast China)

年 卷 期：2023年第25卷第3期

页      码：225-229页

摘      要：目的旨在建立基于实时荧光多酶恒温扩增(exo-MIRA)技术的小鼠细小病毒(MVM)核酸检测新方法。方法收集2021年1月至2022年1月南京大学医学院附属金陵医院实验动物室共75份小鼠肠道内容物标本。针对MVM VP2基因的保守区域设计4对引物,琼脂糖凝胶电泳分析扩增产物以筛选最优引物对,并设计特异性荧光探针,构建exo-MIRA检测法。通过检测梯度稀释模拟样本,进行检出限评价。检测其他小鼠病毒,包括仙台病毒(SV)、小鼠肝炎病毒(MHV)、小鼠鼠痘病毒(Ect)、小鼠肺炎病毒(PVM)、呼肠孤病毒(Reo),分析exo-MIRA法的交叉反应性。采用qPCR法和exo-MIRA法同时检测收集的75份标本,统计分析两种方法的一致性。以qPCR法为参比方法,评估该法的敏感度和特异度,进行诊断效能评价。结果采用exo-MIRA技术建立MVM核酸检测方法,该方法检测MVM的检出限为10 copies/μL,且与其他五种小鼠病毒无交叉反应,可特异性检出MVM。75份标本检出结果显示,exo-MIRA法和qPCR法高度一致,Kappa值为0.921(P<0.05),exo-MIRA法的敏感度为100.0%,特异度为96.7%。结论建立了一种基于实时荧光MIRA恒温扩增技术的MVM核酸检测方法,具有简单快速、实验要求低、敏感特异等优点。该方法可应用于现场复杂环境的即时检测,在实验动物质量检测应用上有一定前景。

主 题 词：小鼠细小病毒 多酶恒温扩增技术 实时荧光 快速检测 

学科分类：100208[100208] 1002[医学-临床医学类] 10[医学] 

D　O　I：10.3969/j.issn.1672-271X.2023.03.001

馆 藏 号：203123301...