蜈蚣配方颗粒的位点特异性PCR鉴别

作     者：许源升 胡力 蒋超 赵玉洋 陈天韵 张辉 田慧 袁媛 XU Yuansheng;HU Li;JIANG Chao;ZHAO Yuyang;CHEN Tianyun;ZHANG Hui;TIAN Hui;YUAN Yuan

作者机构：广西中医药大学南宁530200 中国中医科学院中药资源中心北京100700 华润三九现代中药制药有限公司广东深圳518029 

基　　金：国家自然科学基金项目(82073972) 中央本级重大增减支项目(2060302) 中国中医科学院科技创新工程项目(C12021A041,C12021B014) 

出 版 物：《中国实验方剂学杂志》 (Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae)

年 卷 期：2024年第30卷第4期

页      码：48-54页

摘      要：目的:为进一步保障蜈蚣药材及其制品的质量与临床疗效,建立蜈蚣配方颗粒特异性聚合酶链式反应(PCR)鉴别方法。方法:根据蜈蚣细胞色素C氧化酶亚基3(COX-3)基因序列筛选适用于蜈蚣配方颗粒的稳定引物区间,并在区间内筛选获得蜈蚣及其混伪品的单核苷酸多态性(SNP)位点,设计特异性鉴别引物。分别收集蜈蚣及其混伪品,考察退火温度、循环次数、不同Taq酶、DNA模板量、不同PCR仪、不同引物量等因素对PCR鉴别方法的影响,建立并优化PCR反应体系,并对此方法的专属性及适用性进行考察验证。结果:PCR鉴别反应体系为2×M5 PCR Mix 12.5μL,蜈蚣配方颗粒鉴别引物(10μmol·L^(-1))各0.4μL,DNA模板2.5μL,无菌双蒸水9.2μL。PCR反应参数为94℃预变性3 min,循环反应30次(94℃变性20 s,62℃退火20 s,72℃延伸45 s),72℃延伸5 min。利用上述PCR反应体系和反应参数对蜈蚣药材及其制品进行扩增,电泳检测结果表明所有正品均可在约135 bp处显示出一条明亮条带,而混伪品无条带。结论:建立的特异性PCR鉴别方法可准确对蜈蚣药材、饮片、标准汤剂冻干粉、配方颗粒中间体、配方颗粒成品进行准确鉴别,为进一步保障蜈蚣药材及其制品的质量具有重要意义。

主 题 词：蜈蚣 配方颗粒 单核苷酸多态性(SNP)位点 聚合酶链式反应 

学科分类：1008[医学-中药学类] 100504[100504] 1006[医学-中西医结合类] 1005[医学-中医学类] 1001[医学-基础医学] 100501[100501] 100601[100601] 100502[100502] 100602[100602] 10[医学] 

核心收录：

D　O　I：10.13422/j.cnki.syfjx.20231111

馆 藏 号：203123307...