猪囊尾蚴排泄分泌抗原M13h基因的真核表达质粒的构建及表达分析

作     者：赵光辉 鲁琨 张改平 宁长申 王选年 张龙现 菅复春 宋海涛 ZHAO Guang-hui;LU Kun;ZHANG Gai-ping;NING Chang-shen;WANG Xuan-nian;ZHANG Long-xian;JIAN Fu-chun;SONG Hai-tao

作者机构：河南农业大学牧医工程学院河南郑州450002 河南省农业科学院河南省动物免疫重点实验室河南郑州450002 华南农业大学兽医学院广东广州510642 河南科技学院动物科学学院河南新乡453003 

基　　金：国家“863”计划项目(2003AA249030) 

出 版 物：《河南农业大学学报》 (Journal of Henan Agricultural University)

年 卷 期：2009年第43卷第2期

页      码：168-172页

摘      要：根据GenBank中的参考序列设计并合成引物序列，从pMDM13h中扩增带酶切住点和His—tag的基因序列；用HindⅢ和XhoⅠ双酶切PCR扩增产物和pcDNA3．0载体，连接构建真核表达重组质粒pc3M13h，利用PCR，双酶切和测序鉴定其正确性；重组质粒pc3M13h转染COS-7细胞，瞬时表达的转染细胞（96孔板）在转染36．48h后，应用双抗体夹心酶联免疫吸附试验和免疫细胞化学，分别检测pc3M13h在COS-7细胞培养上清液和细胞内的表达．结果表明，设计合成的引物成功扩增了带有酶切位点和His—tag的基因序列；成功构建了真核表达重组质粒pc3M13，双抗体夹心酶联免疫吸附试验和免疫细胞化学检测显示，pc3M13h重组质粒不但能够在COS-7细胞中进行表达，而且能够进行微量的分泌表达．

主 题 词：猪囊尾蚴 排泄分泌抗原 基因表达 

学科分类：090602[090602] 09[农学] 0906[农学-水产类] 

D　O　I：10.16445/j.cnki.1000-2340.2009.02.019

馆 藏 号：203123348...