猪急性腹泻综合征冠状病毒微滴数字PCR技术的建立和应用

作     者：陈可欣 曾若雪 裘慧 金晨晨 陈小金 董志珍 宋厚辉 张晓峰 帅江冰 CHEN Kexin;ZENG Ruoxue;QIU Hui;JIN Chenchen;CHEN Xiaojin;DONG Zhizhen;SONG Houhui;ZHANG Xiaofeng;SHUAI Jiangbin

作者机构：浙江农林大学动物科技学院·动物医学院杭州311300 浙江省检验检疫科学技术研究院杭州310016 天津海关动植物与食品检测技术天津300461 

基　　金：国家重点研发计划项目(项目号:2021YFF0602800),题目:口岸重要畜禽病原监测的前沿核酸检测装备及技术平台研发 浙江省重点研发计划项目(项目号:2021C02060),题目:进出口饲料质量安全甄别技术研究——进出口饲料安全质量检测及控制关键技术及产品的研发~~ 

出 版 物：《病毒学报》 (Chinese Journal of Virology)

年 卷 期：2023年第39卷第5期

页      码：1385-1394页

摘      要：猪急性腹泻综合征冠状病毒(Swine acute diarrhea syndrome coronavirus,SADS-CoV)是近年来在我国新发现的一种会引起猪严重腹泻的冠状病毒,本文旨在建立一种特异性强、重复性好、灵敏度高的SADS-CoV微滴式数字聚合酶链式反应(Digital droplet PCR,ddPCR)检测方法。采用SADS-CoV的N基因作为本研究的靶基因,根据其基因序列设计特异性引物及探针。通过优化反应体系中的反应条件,分析方法特异性、敏感性和稳定性,并对临床样本和猪源产制品进行检测验证,建立了猪急性腹泻综合征冠状病毒微滴数字PCR体系。本方法确定最佳引物浓度为500 nmol/L,最佳探针浓度为250 nmol/L,且在58℃反应条件下,ddPCR检测结果最优。本方法与其他常见猪源性病毒无交叉反应,特异性强;本方法重复性好,批间与批内变异系数均小于10%。本ddPCR方法在动态范围内最低检测限为3.85拷贝/反应,比荧光定量PCR(qPCR)高10倍以上。采用qPCR和ddPCR分别对90份样品进行检测,ddPCR方法阳性检出率为13.33%(12/90)优于qPCR阳性检出率11.11%(10/90)。本文首次建立了单重SADS-CoV ddPCR检测方法,其有更优的可靠性以及抗干扰性,为定量检测动物组织、饲料、血清和粪便等样品中SADS-CoV提供了新的、稳定的技术手段。

主 题 词：猪急性腹泻综合征冠状病毒 微滴数字PCR 定量检测方法 

学科分类：090601[090601] 09[农学] 0906[农学-水产类] 

核心收录：

D　O　I：10.13242/j.cnki.bingduxuebao.004385

馆 藏 号：203123359...