抗KDR单链抗体的构建、表达及生物学活性鉴定

作     者：李容 熊冬生 许元富 邵晓枫 范冬梅 朱祯平 杨纯正 LI Rong;XIONG Dong-sheng;XU Yuan-fu;SHAO Xiao-feng;FAN Dong-mei;ZHU Zhen-ping;YANG Chun-zheng

作者机构：中国医学科学院中国协和医科大学血液学研究所实验血液学国家重点实验室天津300020 

基　　金：国家攀登计划资助项目(No. 95 专 10) 天津市重大科技攻关资助项目(No. 003119511) 

出 版 物：《细胞与分子免疫学杂志》 (Chinese Journal of Cellular and Molecular Immunology)

年 卷 期：2005年第21卷第1期

页      码：39-42页

摘      要：目的: 构建并表达抗人血管内皮生长因子受体KDR单链抗体(scFv)蛋白, 并测定其生物学活性。方法: 设计合成抗KDR单抗 (mAb)Ycom1D3VH、VL引物, 通过重叠延伸拼接 (splicingoverlapextensive, SOE)PCR, 在VH 和VL基因间引入柔性短肽(Gly4Ser)3, 构建抗KDRscFv基因并进行序列分析。将其克隆入pAYZH原核表达载体, 在大肠杆菌中诱导表达, 并以ELISA及免疫荧光结合实验测定重组蛋白的生物学活性。结果: 序列分析表明, 抗KDRscFv基因的全长为 729bp, 编码 243个氨基酸。将重组体表达产物进行SDS PAGE及Westernblot分析显示, 融合蛋白的相对分子质量(Mr)约为 30 000, 同预期的结果一致。表达产物主要以不溶性包涵体的形式存在, 表达量占菌体总蛋白的 20%。表达产物经变性、纯化及体外复性后, 纯度达 90%以上。ELISA和竞争性免疫荧光结合实验显示, 重组小分子scFv可与可溶性KDR抗原及表达KDR受体的人脐静脉内皮细胞特异性结合, 保留了亲本mAb的抗原结合活性。结论: 成功地构建了抗KDRscFv基因, 并在大肠杆菌中功能性表达, 为靶向诊断、治疗及进一步基因工程改造奠定了基础。

主 题 词：KDR 血管内皮生长因子 单链抗体 基因表达 

学科分类：0710[理学-生物科学类] 1002[医学-临床医学类] 07[理学] 08[工学] 09[农学] 071007[071007] 0901[农学-植物生产类] 0836[0836] 090102[090102] 

核心收录：

D　O　I：10.3321/j.issn:1007-8738.2005.01.011

馆 藏 号：203123415...