猫传染性腹膜炎病毒实时荧光定量PCR方法的建立与应用

作     者：刘妍 黄金龙 杜吉革 朱真 陈小云 王团结 罗玉峰 孙卫东 印春生 LIU Yan;HUANG Jin-long;DU Ji-ge;ZHU Zhen;CHEN Xiao-yun;WANG Tuan-jie;LUO Yu-feng;SUN Wei-dong;YIN Chun-sheng

作者机构：南京农业大学江苏南京210095 中国兽医药品监察所北京102629 

基　　金：国家重点研发计划项目(2022YFD1800603) 

出 版 物：《中国兽医科学》 (Chinese Veterinary Science)

年 卷 期：2023年第53卷第9期

页      码：1095-1101页

摘      要：为建立一种高效准确检测猫传染性腹膜炎病毒(FIPV)的实时荧光定量PCR方法,以FIPV N基因为靶基因设计特异性探针和引物,构建质粒标准品。通过优化反应条件,建立real-time PCR方法,并进行临床检测。经方法优化,所建立方法的标准曲线为y=-3.137x+42.243,R^(2)值为0.999,扩增效率E为108.0%。该方法与猫瘟病毒(FPV)、猫疱疹病毒(FHV)和猫杯状病毒(FCV)无交叉反应,特异性良好;检测最低拷贝数为9.250 copies/μL,比常规PCR方法高出100倍;组内、组间变异系数均小于5.0%,重复性好。采用建立的方法和EvaGreen real-time PCR方法对39份临床样品进行检测,结果,检出阳性样品数分别为24和22,经Kappa检验,两者高度一致。上述结果表明,本研究成功建立了高效、敏感、特异的实时荧光定量PCR方法,可用于FIPV的临床病例检测。

主 题 词：猫传染性腹膜炎病毒 实时荧光定量PCR 鉴别诊断 

学科分类：090601[090601] 09[农学] 0906[农学-水产类] 

D　O　I：10.16656/j.issn.1673-4696.2023.0151

馆 藏 号：203123415...