小反刍兽疫疫苗病毒含量荧光定量PCR检测方法的建立及初步应用

作     者：吉哈利 于子淇 包玉花 洛松西热 索朗拉吉 周海娟 旦增卓玛 王玉恒 JI Ha-li;YU Zi-qi;BAO Yu-hua;Luosongxire;Suolanglaji;ZHOU Hai-juan;Danzengzhuoma;WANG Yu-heng

作者机构：西藏自治区兽医生物药品制造厂西藏拉萨850000 西藏莲茎生物科技有限公司西藏拉萨850000 

基　　金：西藏自治区自然科学基金项目(XZ202201ZR0044G) 西藏自治区重点研发计划项目(XZ202001ZY0044N) 

出 版 物：《中国兽医科学》 (Chinese Veterinary Science)

年 卷 期：2023年第53卷第9期

页      码：1108-1114页

摘      要：为了建立快速、敏感、特异的小反刍兽疫(peste des petits ruminants,PPR)活疫苗中病毒含量的检测方法,本研究根据GenBank数据库中登录的小反刍兽疫病毒(peste des petits ruminants virus,PPRV)基因序列设计合成特异性引物,采用RT-PCR扩增PPRV基因片段,并克隆至pUC57载体上,构建标准品质粒p UC57-N-PPRV,再采用SYBR GreenⅠ染料法进行实时荧光定量PCR(real-time PCR)检测,绘制标准曲线并进行特异性、稳定性和重复性试验,同时应用于检测4批不同厂家生产的PPR活疫苗病毒含量。结果显示,用该方法检测病毒含量为2.61×10^(1)~2.61×10^(9)copies/μL的标准品,各稀释度质粒拷贝数与C_(t)值之间呈良好的线性关系,且相关系数高(R^(2)=0.999),说明引物特异性强。4批不同厂家生产的PPR活疫苗的病毒含量水平差异显著(P<0.05)。结果表明,该方法具有耗时短、灵敏度高、特异性强且稳定等优点,可用于检测PPR活疫苗中病毒含量水平。

主 题 词：小反刍兽疫 实时荧光定量PCR 疫苗 病毒含量 

学科分类：090601[090601] 09[农学] 0906[农学-水产类] 

D　O　I：10.16656/j.issn.1673-4696.2023.0155

馆 藏 号：203123420...