牛源TAK1基因慢病毒载体构建及其在MDBK细胞中的表达

作     者：张帆 姜坤生 王禹淳 马金柱 于立权 宋佰芬 ZHANG Fan;JIANG Kun-sheng;WANG Yu-chun;MA Jin-zhu;YU Li-quan;SONG Bai-fen

作者机构：黑龙江八一农垦大学生命科学技术学院中国大庆163319 中国农业大学动物医学院中国北京100093 

基　　金：国家自然科学基金项目(32272991) 

出 版 物：《动物医学进展》 (Progress In Veterinary Medicine)

年 卷 期：2023年第44卷第9期

页      码：6-11页

摘      要：为了探究转化生长因子-β激活蛋白1(TAK1)在牛疱疹病毒1型(BHV-1)感染中的作用,构建牛源TAK1基因慢病毒载体,筛选TAK1基因稳转过表达细胞株。根据GenBank中牛源TAK1基因序列(登录号:NM-001081595.1)设计引物,PCR扩增目的片段后插入载体中,构建pCDH-CMV-TAK1-MCS-EF1-turboRFP-T2A-Puro慢病毒质粒,将其导入293T细胞进行慢病毒包装及滴度测定。用包装好的慢病毒感染牛肾上皮细胞(MDBK),筛选过表达TAK1基因的稳转细胞株,通过荧光显微镜和免疫印迹试验(Western blot)进一步验证该基因的过表达。重组质粒双酶切与测序结果表明成功建立了pCDH-CMV-TAK1-MCS-EF1-turboRFP-T2A-Puro慢病毒质粒。慢病毒滴度测定结果显示,过表达TAK1基因组病毒滴度为1.0×108 TU/mL,空载体对照组病毒滴度为5.0×108 TU/mL。重组慢病毒以MOI 180转染MDBK细胞,荧光显微镜观察到明显的红色荧光,表明慢病毒质粒转染成功。Western blot结果显示,在相应分子量处检测到目的条带,进一步表明TAK1基因被表达。成功构建了pCDH-CMV-TAK1-MCS-EF1-turboRFP-T2A-Puro慢病毒质粒,并筛选出了过表达TAK1基因的MDBK稳转细胞株,为深入研究TAK1在BHV-1感染中机制的研究奠定基础。

主 题 词：TAK1基因 过表达 慢病毒载体 MDBK细胞 

学科分类：090603[090603] 09[农学] 0906[农学-水产类] 

D　O　I：10.3969/j.issn.1007-5038.2023.09.002

馆 藏 号：203123714...