双重荧光RT-ERA技术快速检测贝类食品中诺如病毒

作     者：吴占文 王帅 康婕 李涛 李红娜 蔡杰 张昊 杨艳歌 袁飞 WU Zhanwen;WANG Shuai;KANG Jie;LI Tao;LI Hongna;CAI Jie;ZHANG Hao;YANG Yange;YUAN Fei

作者机构：中国检验检疫科学研究院国家市场监管重点实验室(食品质量与安全)北京100176 黑龙江八一农垦大学生命科学技术学院黑龙江大庆163000 陕西省产品质量监督检验研究院陕西西安710048 

基　　金：中国检验检疫科学研究院基本科研业务费专项(2022JK36) “十三五”国家重点研发计划重点专项(2018YFC1603606) 

出 版 物：《食品科学》 (Food Science)

年 卷 期：2023年第44卷第18期

页      码：355-363页

摘      要：目的:基于逆转录-酶促重组等温扩增(reverse transcription-enzymatic recombinase amplification,RTERA)技术,以MS2作为模式过程控制病毒,建立一种贝类食品中GI与GII型诺如病毒(norovirus,NoV)双重荧光RT-ERA快速检测方法。方法:分别将GI、GII NoV参考靶序列克隆到带有T7启动子的载体中,通过体外转录的方式获得高纯度NoV RNA参考样品。以设计的MS2噬菌体引物探针,与实验室前期筛选的GI、GII NoV引物探针进行双重荧光RT-ERA实验,并对反应体系和反应程序进行优化,分析方法的灵敏度。最后,采用建立的方法开展真实样本检测,以GB 4789.42-2016《食品微生物学检验诺如病毒检验》为参比方法进行检测结果对比,确定方法的准确性和可行性。结果:建立MS2与GI、MS2与GII两组双重荧光RT-ERA检测方法,最佳引物及探针体积分别为4.1μL与1.8μL,检测时间可缩短至10 min左右,且最低可检出102拷贝/μL的NoV核酸样品。应用所建立的方法对29份真实样品进行检测,检测结果与GB 4789.42-2016一致。结论:本研究建立的双重荧光RT-ERA检测方法可实现对MS2、GI和GII NoV的同时检测,且灵敏度高、准确性强,为今后NoV现场快速检测提供一定基础。

主 题 词：诺如病毒 逆转录-酶促重组等温扩增技术 双重荧光 快速检测 贝类 

学科分类：0710[理学-生物科学类] 1004[医学-公共卫生预防医学类] 0901[农学-植物生产类] 0836[0836] 100403[100403] 10[医学] 

核心收录：

D　O　I：10.7506/spkx1002-6630-20221126-300

馆 藏 号：203123977...