牛冠状病毒TaqMan荧光定量检测方法的建立及国内部分地区流行病学调查

作     者：黄金 李思远 谢玲玲 周迪 杨蓉 王松 周华 蔡旭航 李基棕 李彬 Huang Jin

作者机构：江苏省农业科学院兽医研究所/农业农村部兽用生物制品工程技术重点实验室江苏南京210014 南京农业大学动物医学院江苏南京210095 江苏大学生命科学学院食品与生物工程学院江苏镇江212013 贵州省种畜禽种质测定中心贵州贵阳550018 贵州省草地技术试验推广站贵州贵阳550025 黔西市动物疫病预防控制中心贵州黔西551500 西北农林科技大学动物医学院陕西杨凌712100 

基　　金：国家重点研发计划(编号:2021YFD1801101) 江苏省自然科学基金(编号:BK20221432) 

出 版 物：《江苏农业科学》 (Jiangsu Agricultural Sciences)

年 卷 期：2023年第51卷第17期

页      码：29-33页

摘      要：牛冠状病毒(BCoV)在全球广泛存在,在临床上能引起牛腹泻以及呼吸道感染,给养殖业带来巨大经济损失。为快速批量检测临床样品、分析国内的BCoV隐性感染及流行情况,根据BCoV的N基因序列设计了引物和探针,建立了TaqMan荧光定量RT-PCR检测方法,对其特异性、敏感性、重复性进行评估,并将其与靶向BCoV的N基因的常规RT-PCR方法进行对比。利用本方法对采集自我国西藏、江苏、河北、贵州、安徽等5个省份的22个未发病牛场的35份口腔拭子样品和244份粪便样品进行检测以了解流行情况。结果表明,质粒标准品拷贝数的对数与C T值呈现良好稳定的负线性关系,标准曲线为y=-3.4418 x+39.5840,r^(2)=0.9994,E=98.2%;最低检测拷贝数为6.0×10拷贝/μL,重复性变异系数均<5%;对临床样品进行检测,检出率明显高于常规RT-PCR方法。对22个牛场的279份病料进行检测,结果显示BCoV的总体阳性率为73.12%,牛场阳性率为100.00%。本研究成功建立了靶向BCoV N基因、灵敏度高、特异性好的荧光定量RT-PCR检测方法,并初步掌握了我国5个省份BCoV的流行现状,为后续BCoV研究奠定了基础。

主 题 词：牛冠状病毒 TaqMan荧光定量 样品检测 隐性感染 RT-PCR 

学科分类：090601[090601] 09[农学] 0906[农学-水产类] 

D　O　I：10.15889/j.issn.1002-1302.2023.17.004

馆 藏 号：203123984...