东海原甲藻线粒体细胞色素b(Cytb)基因的定量检测

作     者：赵丽媛 于志刚 甄毓 米铁柱 ZHAO Li-Yuan;YU Zhi-Gang;ZHEN Yu;MI Tie-Zhu

作者机构：中国海洋大学海洋生命学院山东青岛266100 中国海洋大学海洋化学理论与工程技术教育部重点实验室山东青岛266100 中国海洋大学环境与生态教育部重点实验室山东青岛266100 

基　　金：国家自然科学基金项目(40406028) 国家高技术发展计划项目(2006AA09Z178)资助 

出 版 物：《中国海洋大学学报（自然科学版）》 (Periodical of Ocean University of China)

年 卷 期：2009年第39卷第3期

页      码：448-452页

摘      要：建立了检测东海原甲藻线粒体细胞色素b(Cytb)基因mRNA含量的实时荧光定量PCR方法。以甲藻Cytb基因的简并引物扩增得到984 bp长的东海原甲藻Cytb基因片段,经克隆、测序,制备并纯化质粒。以光度法测定质粒浓度并作为标准品。对上述基因片段,利用PRIMER EXPRESS 3.0设计引物,以梯度稀释的质粒标准品进行定量PCR反应,以SYBR Green I为荧光染料,制作标准曲线,得到基因拷贝数X与Ct值的关系为:Ct=-3.50 lgX+39.35(相关系数r为0.999)。通过对不同生长时期的东海原甲藻样品的Cytb基因mRNA含量检测,发现该基因的表达量较稳定,平均值为(45.4±4.7)拷贝/细胞,受生长状态影响不大,可作为实时荧光定量PCR的内参基因。

主 题 词：线粒体细胞色素b基因 东海原甲藻 实时荧光定量PCR 内参基因 

学科分类：0710[理学-生物科学类] 071010[071010] 07[理学] 

核心收录：

D　O　I：10.3969/j.issn.1672-5174.2009.03.029

馆 藏 号：203124047...