鸡TBX6过表达和干扰载体构建及干扰载体效率检测

作     者：武嵘峰 陈欣雨 胡菜 耿晴晴 程富富 席一凡 左其生 张亚妮 WU Rongfeng;CHEN Xinyu;HU Cai;GENG Qingqing;CHENG Fufu;XI Yifan;ZUO Qisheng;ZHANG Yani

作者机构：扬州大学动物科学与技术学院江苏省动物遗传繁育与分子设计重点实验室江苏扬州225009 

基　　金：江苏省研究生实践创新计划项目(SJCX22_1795) 大学生科创基金项目(X20210648) 

出 版 物：《中国家禽》 (China Poultry)

年 卷 期：2023年第45卷第10期

页      码：12-18页

摘      要：研究旨在构建TBX6的过表达和干扰载体,为后续研究TXB6在精原干细胞(Sper⁃matogonial stem cells,SSCs)形成过程中的功能奠定基础。通过qRT-PCR检测TBX6在胚胎干细胞(Embryonic stem cells,ESCs)和SSCs的表达水平,根据NCBI上提供的TBX6 CDS区的序列,设计引物扩增目的片段,将其连接到经线性化的慢病毒载体pCDH-CMV-MCS-EF1-copG⁃FP-T2A-Puro上,构建TBX6的过表达载体;同时,根据TBX6 CDS区设计三个干扰靶点,在退火后将其连接到经线性化的干扰载体pLVX-shRNA2-puro上,并且进一步将三个干扰载体转染鸡成纤维细胞系(DF-1),观察荧光表达情况并通过qRT-PCR检测其干扰效率。结果显示,TBX6在SSCs上的表达量显著高于ESCs(P<0.05),测序和双酶切验证显示成功构建TBX6过表达及干扰载体;干扰载体转染DF-1细胞后均能稳定表达EGFP荧光蛋白,且shRNA2-TBX6的干扰效果最好。结果表明,TBX6过表达及干扰载体构建成功,且经定量检测后确定shRNA2-TBX6的干扰效果最好。

主 题 词：TBX6 过表达载体 干扰载体 

学科分类：0905[农学-林学类] 09[农学] 090501[090501] 

D　O　I：10.16372/j.issn.1004-6364.2023.10.003

馆 藏 号：203124068...