基于荧光及可视化逆转录环介导等温扩增检测食源性甲型肝炎病毒的方法开发

作     者：崔健 高子惠 张晓波 杨莉莉 胡冰 郑秋月 朴永哲 曹际娟 CUI Jian;GAO Zi-Hui;ZHANG Xiao-Bo;YANG Li-Li;HU Bing;ZHENG Qiu-Yue;PIAO Yong-Zhe;CAO Ji-Juan

作者机构：大连民族大学生命科学学院生物技术与资源利用教育部重点实验室大连116600 

基　　金：辽宁省“兴辽英才计划”项目(XLYC2002106) 

出 版 物：《食品安全质量检测学报》 (Journal of Food Safety and Quality)

年 卷 期：2023年第14卷第18期

页      码：103-111页

摘      要：目的基于荧光及可视化逆转录环介导等温扩增(reverse transcription loop-mediated isothermal amplification,RT-LAMP)开发食源性甲型肝炎病毒(hepatitis A virus,HAV)的检测方法。方法从美国国家生物技术信息中心中选取世界范围内具有代表性的HAV基因信息,设计LAMP引物,开发了一种荧光曲线RT-LAMP和可视化RT-LAMP检测方法。以HAV质粒为模板,评估方法的扩增效率、灵敏度和稳健性,并与实时荧光逆转录-聚合酶链式反应(reverse transcription-polymerase chain reaction,RT-PCR)进行检出限及实际样品验证比较。结果荧光及可视化LAMP方法检测灵敏度为10.76copies/μL,与实时荧光RT-PCR一致;在95%置信水平下经概率回归分析检出限(limitofdetection,LOD_(95%)),荧光曲线RT-LAMP的LOD_(95%)为17.46copies/μL(7.00~511.29 copies/μL,95%),实时荧光RT-PCR的LOD_(95%)为79.30copies/μL(24.68~3208.71copies/μL,95%);稳健性分析表明方法稳定;与实时荧光RT-PCR比较,检测30份实际样品的验证比对符合率为100%。结论该检测方法经济便捷,可通过肉眼直接观察结果,适合于食品安全现场监测,具有很好的应用前景。

主 题 词：环介导等温扩增 可视化 甲型肝炎病毒 快速检测 

学科分类：09[农学] 0903[农学-动物生产类] 

D　O　I：10.19812/j.cnki.jfsq11-5956/ts.2023.18.046

馆 藏 号：203124139...