利用CRISPR/Cas9系统构建SIRT1基因敲除的K562细胞株

作     者：温后烺 陈婧 曾杰清 彭流泉 陈日玲 马国达 张海涛 汪亚君 WEN Hou-lang;CHEN Jing;ZENG Jie-qing;PENG Liu-quan;CHEN Ri-ling;MA Guo-da;ZHANG Hai-tao;WANG Ya-jun

作者机构：广东医科大学顺德妇女儿童医院广东佛山528300 广东医科大学生化教研室广东湛江524023 

基　　金：国家自然科学基金面上项目(81770034) 广东省基础与应用基础研究基金粤佛联合基金(2022A1515140167) 广东医科大学顺德妇女儿童医院博士启动项目(2021BSQD001) 佛山市顺德区医学骨干人才培养项目 

出 版 物：《广东医科大学学报》 (Journal of Guangdong Medical University)

年 卷 期：2023年第41卷第5期

页      码：504-508,514页

摘      要：目的构建去乙酰化酶SIRT1基因敲除的K562单克隆细胞株,研究SIRT1基因对细胞增殖的影响。方法设计靶向SIRT1酶活性中的sgRNA编码序列,构建CRISPR/Cas9载体并转染K562细胞,嘌呤霉素筛选后单克隆化并扩增;采用基因组测序、PCR和免疫印迹的方法进行基因敲除效果鉴定;对选定的SIRT1基因敲除的单克隆做生长曲线检测。结果目标质粒测序符合,质粒转染细胞后检测到基因组靶序列位置杂合峰,获得SIRT1基因敲除的单克隆3个,SIRT1基因敲除导致细胞增殖明显减缓。结论成功构建了SIRT1基因敲除的细胞株,该细胞可作为血液系统疾病研究的有力工具。

主 题 词：CRISPR-Cas9 SIRT1 基因敲除 K562 细胞增殖 

学科分类：0710[理学-生物科学类] 07[理学] 071009[071009] 09[农学] 0901[农学-植物生产类] 090102[090102] 

D　O　I：10.3969/j.issn.1005-4057.2023.05.005

馆 藏 号：203124184...