肠道病毒71型真核双基因表达载体的构建

作     者：姚相杰 何雅青 蔡春林 杨洪 冼慧霞 张海龙 罗敏 张仁利 

作者机构：广东省深圳市疾病预防控制中心微生物检验科518055 广东省深圳市罗湖区疾病预防控制中心微生物检验科518020 

基　　金：广东省医学科研基金(B2010287) 广东省深圳市罗湖区软科学计划(2010069) 

出 版 物：《检验医学与临床》 (Laboratory Medicine and Clinic)

年 卷 期：2012年第9卷第23期

页      码：2916-2918页

摘      要：目的通过克隆肠道病毒71型结构前体蛋白P1和非结构蛋白3CD,构建共表达P1前体蛋白和非结构蛋白3CD的真核双基因表达载体。方法设计合成脑心肌炎病毒(EMCV)IRES序列的特异性引物,克隆至真核表达载体pcDNA3.0上,命名为pc-IRES。从手足口病重症患者分离EV71病毒株,经逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)技术分别扩增出EV71病毒的P1前体蛋白区与3CD区的片段,并将其定向克隆至真核表达载体pc-IRES载体中IRES序列的上游和下游,随后转化到大肠埃希菌DH5α中,最后经PCR和双酶切鉴定转化菌落。结果通过重组质粒p-IRES-P1-3CD进行酶切和DNA序列分析,重组真核双基因表达载体p-IRES-P1-3CD构建成功。结论成功构建共表达EV71病毒P1前体蛋白和非结构蛋白3CD真核双基因表达载体,这将为下一步制备基于DNA载体的EV71病毒的类病毒颗粒疫苗打下基础。

主 题 词：肠道病毒71型 类病毒颗粒 疫苗 

学科分类：1001[医学-基础医学] 100102[100102] 10[医学] 

D　O　I：10.3969/j.issn.1672‐9455.2012.23.002

馆 藏 号：203124205...