半理性设计提高甲酸脱氢酶(Cb FDH)活力及热稳定性

作     者：倪晗朦 胡孟凯 张恒维 张显 潘学玮 饶志明 周楠迪 NI Hanmeng;HU Mengkai;ZHANG Hengwei;ZHANG Xian;PAN Xuewei;RAO Zhiming;ZHOU Nandi

作者机构：江南大学生物工程学院江苏无锡214122 

基　　金：国家重点研发计划项目(2021YFC2100900) 国家自然科学基金项目(32171471,32071470) 中国博士后科学基金资助项目(2021M691280) 江苏省博士后科研资助计划项目(2021K296B) 江苏高校优势学科建设工程资助项目 江苏高校品牌专业建设工程资助项目 

出 版 物：《食品与生物技术学报》 (Journal of Food Science and Biotechnology)

年 卷 期：2023年第42卷第10期

页      码：1-8页

摘      要：甲酸脱氢酶(formate dehydrogenase,FDH)是NADH循环再生的最佳酶之一,广泛应用于食品、医药和化工等行业。但是野生型甲酸脱氢酶普遍存在酶活低、催化效率差等缺点,导致产品转化率较低,影响产品的工业化生产。为了获得具有更佳催化性能的甲酸脱氢酶,作者以博伊丁假丝酵母(Candida boidinii)来源的甲酸脱氢酶为模板,利用HOTSPOT WIZARD v3.1进行三维结构模拟预测,构建了P68G、Q197K两个突变体,比酶活较野生型分别提高了11%和33%。这是由于P68G氨基酸残基侧链的苯环被氢取代,减少了甲酸盐底物进入口袋的空间位阻;而Q197K侧链酰胺基突变为胺丁基增强了酶的柔性。然而这两个突变点对甲酸脱氢酶的热稳定性产生了负面影响,因此在I239位引入半胱氨酸突变与C262构成二硫键以提高其热稳定性,最终获得一株热稳定性显著提高,比酶活较野生型提高31%、较I239C提高45%的突变株Cb FDH Q197K/I239C。通过半理性预测蛋白质结构提高了甲酸脱氢酶的活力和热稳定性,为高效构建性能稳定、还原力强的甲酸脱氢酶提供了理论基础。

主 题 词：甲酸脱氢酶 半理性设计 博伊丁假丝酵母 定点突变 辅酶循环 

学科分类：0710[理学-生物科学类] 07[理学] 08[工学] 09[农学] 071007[071007] 0901[农学-植物生产类] 0836[0836] 090102[090102] 

D　O　I：10.12441/spyswjs.20220322002

馆 藏 号：203124234...