猪TRIM56敲除细胞系的构建及在增殖PRRSV疫苗毒株中的应用

作     者：张秀婷 吴香菊 齐静 丛晓燕 李均同 陈大全 姜宁朋 杜以军 ZHANG Xiuting;WU Xiangju;QI jing;CONG Xiaoyan;LI Juntong;CHEN Daquan;JIANG Ningpeng;DU Yijun

作者机构：烟台大学药学院山东烟台264005 山东省农业科学院畜牧兽医研究所/山东省畜禽疫病防治与繁育重点实验室山东济南250100 山东省科技服务发展推进中心山东济南250101 

基　　金：山东省自然科学基金项目(ZR2020QC196,ZR2020KC005,ZR2021MC139,ZR2021ZD08) 国家自然科学基金项目(32102710) 国家重点研发计划(2021YFD1800300) 山东省农业科学院农业科技创新项目(CXGC2023A21) 

出 版 物：《畜牧与兽医》 (Animal Husbandry & Veterinary Medicine)

年 卷 期：2023年第55卷第11期

页      码：117-123页

摘      要：利用CRISPR/Cas9基因编辑技术构建1株猪TRIM56基因敲除的PAM-KNU细胞系,并探究其在增殖猪繁殖与呼吸综合征病毒(porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)疫苗毒株中的应用。根据猪TRIM56基因组外显子区域设计合成2对特定的向导RNA引物,将引物磷酸化、退火并连接至Px459M和EZ-Guide-XH载体构建敲除质粒Px459M-sTRIM56-KO;将敲除质粒转染PAM-KNU细胞,经嘌呤霉素筛选、有限稀释法筛选获得单克隆细胞并扩大培养;通过RT-PCR、测序及Western blot筛选鉴定,最终获得了敲除细胞系sTRIM56-KO-PAM-KNU;将PRRSV R98疫苗株感染野生型细胞及敲除细胞系,利用real-time RT-PCR、半数组织培养感染量(TCID_(50))以及Western blot检测PRRSV增殖情况。结果显示,TRIM56敲除细胞系构建成功,该敲除细胞系中sTRIM56基因编码区第929~2120位1192个碱基缺失,未检测到sTRIM56蛋白条带;敲除细胞系中PRRSV R98疫苗株病毒拷贝数、病毒滴度以及N蛋白表达均显著高于对照组。本研究为猪TRIM56抗病毒机制研究及PRRSV疫苗研发奠定了基础。

主 题 词：猪TRIM56基因 基因敲除 PAM-KNU细胞 猪繁殖与呼吸综合征病毒 

学科分类：090601[090601] 09[农学] 0906[农学-水产类] 

馆 藏 号：203124288...