基于RPA/CRISPR-Cas12a技术的单核细胞增生李斯特菌快速检测方法建立

作     者：陈大伟 李兵兵 魏明月 李双姝 杨鹏飞 刘靓 CHEN Dawei;LI Bingbing;WEI Mingyue;LI Shuangshu;YANG Pengfei;LIU Liang

作者机构：淮安市疾病预防控制中心检验科江苏省食品安全风险监测重点实验室(致病菌)江苏淮安223003 

基　　金：淮安市卫生健康科研项目(HAWJ202122) 江苏省预防医学科研课题(Y2018047) 

出 版 物：《肉类研究》 (Meat Research)

年 卷 期：2023年第37卷第9期

页      码：46-51页

摘      要：建立基于RPA/CRISPR-Cas12a技术单核细胞增生李斯特菌的快速检测方法。选取单增李斯特菌溶菌素毒力基因hly(GeneID:987033),设计重组酶聚合酶扩增(recombinase polymerase amplification,RPA)引物结合CRISPR-Cas12a蛋白研制两步法单增李斯特菌快速检测试剂盒,并对其灵敏度、特异性以及反应速率进行分析。结果表明:该法检测速率快,30 min内可检出单核细胞增生李斯特菌,同时具有较高的灵敏度,20μL体系可检测到最低0.0015 ng靶标核酸。将该试剂盒进一步用于检测人工模拟污染食品三文鱼肉片,检测限可达10 CFU/mL。本方法检测30份实际样本,结果均与荧光定量聚合酶链式反应法阳性检出率一致。RPA/CRISPR-Cas12a技术是快速检测食源性单增李斯特菌的可行方法。

主 题 词：单核细胞增生李斯特菌 重组酶聚合酶扩增 CRISPR-Cas12a 快速检测 

学科分类：0710[理学-生物科学类] 07[理学] 08[工学] 09[农学] 071007[071007] 0901[农学-植物生产类] 0836[0836] 090102[090102] 

D　O　I：10.7506/rlyj1001-8123-20230710-066

馆 藏 号：203124386...