H9N2亚型禽流感病毒HA1蛋白的原核表达及间接ELISA抗体检测方法的建立

作     者：李龙飞 黄傲雪 袁佳欣 巨鹏昊 李乐梅 王美欢 闫茗硕 徐彤 LI Long-fei;HUANG Ao-xue;YUAN Jia-xin;JU Peng-hao;LI Le-mei;WANG Mei-huan;YAN Ming-shuo;XU Tong

作者机构：河北北方学院动物科技学院河北张家口075000 

基　　金：河北省自然科学基金项目(C2022405008) 河北省高等学校科学技术研究项目(QN2022015) 2022年河北省大中学生科技创新能力培育专项(22E50157D) 河北省第三期现代农业产业技术体系蛋鸡肉鸡(家禽)创新团队建设专项(HBCT2023210208) 

出 版 物：《中国兽医科学》 (Chinese Veterinary Science)

年 卷 期：2023年第53卷第11期

页      码：1377-1383页

摘      要：为建立H9N2亚型禽流感病毒(AIV)抗体快速、高效的血清学检测方法,参考GenBank数据库中H9N2 AIV的HA基因序列(登录号:MK995886.1)设计并合成特异性引物,以H9N2 AIV RNA为模板,RT-PCR扩增目的基因HA1,构建pET28a-HA1重组质粒,经原核系统表达获得HA1蛋白。通过SDS-PAGE和Western-blot鉴定蛋白表达和反应原性,用纯化后的HA1重组蛋白作为包被抗原建立间接ELISA方法。结果显示,该检测方法抗原最佳包被浓度为0.2μg/mL,血清最佳稀释度为1∶160,用1%BSA溶液37℃封闭60 min效果最佳,酶标二抗最佳稀释度为1∶6 000,具有较高的特异性、灵敏性和符合率。上述结果表明,本试验成功表达并纯化了H9N2 AIV的HA1蛋白,建立的间接ELISA检测方法为H9N2 AIV的流行病学调查、免疫效果评价及临床诊断试剂盒的开发奠定了基础。

主 题 词：H9N2亚型禽流感病毒 HA1蛋白 原核表达 间接ELISA 

学科分类：090601[090601] 09[农学] 0906[农学-水产类] 

D　O　I：10.16656/j.issn.1673-4696.2023.0182

馆 藏 号：203124430...