基于重组酶介导等温扩增技术建立人腺病毒14型快速检测方法及初步应用评价

作     者：刘晴晴 王宁宁 成军 周华君 车飞虎 杨春利 孙青阳 王月 戴玉柱 张英杰 LIU Qingqing;WANG Ningning;CHENG Jun;ZHOU Huajun;CHE Feihu;YANG Chunli;SUN Qingyang;WANG Yue;DAI Yuzhu;ZHANG Yingjie

作者机构：蚌埠医学院检验医学院安徽蚌埠233000 中国人民解放军联勤保障部队第九〇三医院临床研究部杭州310013 

基　　金：浙江省自然科学基金(批准号:LGF20H200009):基于RAA技术在ARID病原快速检测中的应用研究 浙江省医药卫生科技规划项目(批准号:2019331539):军营内呼吸道感染HADV-55型的流行病学特征及迁徙分析 杭州市医药卫生科技规划项目(批准号:OO20190415):军营内呼吸道感染HADV-55型的流行病学特征及迁徙分析 

出 版 物：《现代检验医学杂志》 (Journal of Modern Laboratory Medicine)

年 卷 期：2023年第38卷第6期

页      码：13-18,29页

摘      要：目的 基于重组酶介导的等温扩增技术(recombinase-aided amplification, RAA)开发一种快速、准确的人腺病毒14型检测方法。方法 根据人腺病素14型(human adenovirus serotype 14, HAdV-14)的Hexon基因序列,使用Primer 6.0软件设计特异性引物及探针,并构建阳性质粒标准品,优化反应条件,建立一种快速RAA检测方法,并对该方法的灵敏度及特异度进行评价。收集2017~2022年中国人民解放军联勤保障部队第九〇三医院发热性呼吸综合征患者的咽拭子50份,应用建立的实时荧光RAA测定法进行检测,结果与实时荧光PCR检测结果进行比较。结果 最终确定了最佳引物探针组合为HAdV14-F1-4,HAdV14-R1和HAdV14-P;经反应条件优化,40℃进行RAA扩增效果最佳;该方法灵敏度为10~1 copies/μl,当质粒标准品浓度为10^(4),10^(3),10^(2)和10^(1) copies/μl时,批内变异系数均<5%;50例临床样本中HAdV-14的检测结果与实时荧光PCR一致。结论 建立了一种基于RAA技术的HAdV-14快速检测方法,可以在仅有简单恒温设备的条件下检测HAdV-14。

主 题 词：人腺病毒14型 重组酶介导的等温扩增技术 快速分子诊断 

学科分类：0710[理学-生物科学类] 1007[医学-药学类] 071010[071010] 100705[100705] 081704[081704] 07[理学] 1001[医学-基础医学] 08[工学] 0817[工学-轻工类] 100103[100103] 10[医学] 

D　O　I：10.3969/j.issn.1671-7414.2023.06.003

馆 藏 号：203124525...