猪呼吸道病原菌多重PCR检测方法的建立及应用

作     者：吴艳 黎娜铭 张宇鑫 张伟 陈穗莲 黄云 田永宽 曾智勇 吴学祥 王彬 WU Yan;LI Na-ming;ZHANG Yu-xin;ZHANG Wei;CHEN Sui-lian;HUANG Yun;TIAN Yong-kuan;ZENG Zhi-yong;WU Xue-xiang;WANG Bin

作者机构：贵州大学动物科学学院贵州贵阳550025 贵州省独山县麻尾镇人民政府贵州独山558200 

基　　金：贵州省科技计划项目(黔科合支撑1Y033号 黔科合支撑2276号) 

出 版 物：《动物医学进展》 (Progress In Veterinary Medicine)

年 卷 期：2023年第44卷第12期

页      码：82-87页

摘      要：为建立一种快速诊断由猪链球菌(SS)、猪胸膜肺炎放线杆菌(App)、猪多杀性巴氏杆菌(Pm)、副猪嗜血杆菌(Hps)、猪支气管败血波氏杆菌(Bb)和猪肺炎支原体(Mhp)单独或混合感染引起的猪呼吸道疾病的检测方法,基于上述6种病原菌对应的gdh(SS)、apxⅣA(App)、KMT1(Pm)、16S rRNA(Hps)、fla(Bb)和p36 ldh(Mhp)基因设计特异性引物,通过优化各反应条件建立了能同时检测SS、App、Pm、Hps、Bb和Mhp的多重PCR方法。结果显示,该方法特异性强,仅对SS、App、Pm、Hps、Bb和Mhp有特异性扩增,对大肠埃希氏菌、奇异变形杆菌、停乳链球菌和金黄色葡萄球菌等其他病原菌的扩增结果均为阴性;敏感性较高,对6种病原菌DNA的最低检出限分别为SS 8.66×10^(2)拷贝/μL、App 1.05×10^(4)拷贝/μL、Pm 8.61×10^(2)拷贝/μL、Hps 9.01×10^(2)拷贝/μL、Bb 7.54×10^(2)拷贝/μL、Mhp 3.86×10^(3)拷贝/μL。利用该多重PCR和各单项PCR分别检测贵州省9个市(州)部分猪场的469份临床样品,结果显示,多重PCR阳性检出率为App 0.85%(4/469)、Pm 15.35%(72/469)、SS 59.49%(279/469)、Hps 52.67%(247/469)、Mhp 6.40%(30/469)、Bb 5.12%(24/469)。混合感染主要以SS和Hps为主,阳性检出率为30.92%(145/469),其次是Pm、SS和Hps混合感染,阳性检出率为7.04%(33/469),其他混合感染情况占比较低。多重PCR和单项PCR的总阳性符合率为96.76%。结果表明,建立的多重PCR检测方法为SS、App、Pm、Hps、Bb和Mhp混合感染的临床快速检测及流行病学调查提供了技术支持。

主 题 词：猪 呼吸道 病原菌 多重聚合酶链反应 

学科分类：090603[090603] 090601[090601] 09[农学] 0906[农学-水产类] 

D　O　I：10.3969/j.issn.1007-5038.2023.12.015

馆 藏 号：203124527...