水产品中哈维氏弧菌等温快速检测方法优化及比较

作     者：仲瑶 贾惠齐 苏鹏 刘玉欣 孔昕荟 龚思颖 郑秋月 曹际娟 ZHONG Yao;JIA Hui-Qi;SU Peng;LIU Yu-Xin;KONG Xin-Hui;GONG Si-Ying;ZHENG Qiu-Yue;CAO Ji-Juan

作者机构：大连民族大学生命科学学院生物技术与资源利用教育部重点实验室大连116600 大连富谷食品有限公司大连116400 

基　　金：大连市“揭榜挂帅”计划项目(XLYC2002106) 大连市科技创新基金项目(2022JJ13SN090) 

出 版 物：《食品安全质量检测学报》 (Journal of Food Safety and Quality)

年 卷 期：2023年第14卷第22期

页      码：143-151页

摘      要：目的 基于核酸等温扩增技术,建立荧光法、可视化环介导恒温扩增(loop-mediatedisothermal amplification,LAMP)和重组酶聚合酶扩增(recombinasepolymeraseamplification,RPA)快速检测哈维氏弧菌(Vibrio harveyi)的分析方法,并对方法进行优化和比较。方法 选择哈维氏弧菌toxR基因为特异靶标序列,分别设计了2组LAMP引物、3组RPA引物,对方法进行筛选。优化建立了荧光法LAMP、可视化LAMP、普通RPA3种等温扩增方法,对3种方法的特异性和灵敏度进行比较,并用模拟污染样本验证检测实际样品的灵敏度。结果 基于快速提取的哈维氏弧菌基因组DNA,本研究所建立的荧光法LAMP、可视化LAMP、普通RPA 3种等温扩增方法均具有良好的特异性,与同属及近属的细菌没有交叉反应。3种方法的灵敏度分别为5.27 fg/μL (1.99 fg/μL~0.93 pg/μL, 95%置信区间)、0.11 ng/μL、1.07 pg/μL;荧光LAMP和普通RPA对模拟污染样本的灵敏度分别为7 CFU/mL和97 CFU/mL。结论 本研究建立优化的3种等温快速检测方法结果准确、操作简单,扩增效率和灵敏度优于文献报道的同类方法,提高了哈维氏弧菌现场快速检测水平。

主 题 词：哈维氏弧菌 荧光法 可视化环介导等温扩增技术 重组酶聚合酶扩增 

学科分类：0832[0832] 08[工学] 083204[083204] 

D　O　I：10.19812/j.cnki.jfsq11-5956/ts.2023.22.014

馆 藏 号：203124773...