牛结节性皮肤病病毒LAMP快检方法的建立与应用

作     者：袁向芬 许晓琳 孔玉方 吕继洲 王慧煜 王彩霞 张舟 邓俊花 景志忠 吴绍强 YUAN Xiang-fen;XU Xiao-lin;KONG Yu-fang;LÜJi-zhou;WANG Hui-yu;WANG Cai-xia;ZHANG Zhou;DENG Jun-hua;JING Zhi-zhong;WU Shao-qiang

作者机构：中国检验检疫科学研究院北京100176 中国农业科学院兰州兽医研究所甘肃兰州730046 

基　　金：海南省重点研发项目(ZDYF2023XDNY061) 中国检验检疫科学研究院基本科研业务费项目(2022JK52) 国家市场监督管理总局专项(2013810-23) 

出 版 物：《中国兽医科学》 (Chinese Veterinary Science)

年 卷 期：2023年第53卷第11期

页      码：1355-1362页

摘      要：本研究旨在建立一种特异性检测牛结节性皮肤病病毒(LSDV)的LAMP快检方法,以用于该病临床早期诊断与监测。笔者根据LSDV的特异性基因序列,设计了数十套LAMP引物,经过筛选最终确定1套反应效率最高的引物,其位于LSDV095基因序列内。以实验室保存的PUC57-LSDV质粒作为阳性质控进行方法的优化与验证,基于不同的检测需求,分别建立了实时浊度LAMP检测方法、实时荧光LAMP检测方法及荧光可视化LAMP检测方法。优化后的3种LSDV LAMP方法灵敏度均可达20 copies/反应的靶基因,与WOAH推荐的实时荧光PCR方法(5 copies/反应)相近;特异性良好,与山羊痘病毒(GTPV)、绵羊痘病毒(SPPV)、小反刍兽疫病毒(PPRV)、赤羽病病毒(AKV)、蓝舌病病毒(BTV)及口蹄疫病毒(FMDV)均无交叉反应。其中,实时浊度法操作程序简单,实时荧光法反应快速(25 min内完成检测),荧光可视化法不依赖专用仪器及中心实验室。将所建方法应用于临床样本的检测,显示这3种方法均可特异性检测到LSDV,与实时荧光PCR方法检测结果一致性为100%,优于WOAH推荐的普通PCR方法。所建方法具有快速、特异、灵敏、操作简便且不依赖专用仪器等优点,可为LSDV的临床快速筛查提供技术支持。

主 题 词：牛结节性皮肤病病毒 环介导等温扩增技术(LAMP) 快检技术 

学科分类：090601[090601] 09[农学] 0906[农学-水产类] 

D　O　I：10.16656/j.issn.1673-4696.2023.0187

馆 藏 号：203124952...