联合酶解法结合UPLC Q-TOF高分辨质谱检测重组水蛭素蛋白的二硫键结构

作     者：徐金华 赵丽丽 柳常青 张贵民 刘忠 XU Jinhua;ZHAO Lili;LIU Changqing;ZHANG Guimin;LIU Zhong

作者机构：山东新时代药业有限公司山东临沂273400 哺乳动物细胞高效表达国家工程实验室山东临沂273400 鲁南新时代生物技术有限公司山东临沂273400 鲁南制药集团股份有限公司山东临沂276000 

基　　金：山东省重点研发计划(泰山产业领军人才工程)项目(2018TSCYCX-30、tscy20200329、tscx202306088) 

出 版 物：《中国医药工业杂志》 (Chinese Journal of Pharmaceuticals)

年 卷 期：2023年第54卷第11期

页      码：1636-1645页

摘      要：采用联合酶切法结合UPLC Q-TOF高分辨质谱解析重组水蛭素蛋白的复杂二硫键交联结构。首先从蛋白水平验证重组水蛭素蛋白是否含有游离半胱氨酸,包括高分辨质谱表征相对分子质量和定量检测游离巯基;然后利用单一酶解法标注每个或每组二硫键在蛋白序列中所处的位置;最后根据单酶所测结果,设计混合酶切的方式确定具体的二硫键配对方式,并利用二硫苏糖醇还原法加以验证,最终确证重组水蛭素蛋白的二硫键位置。结果显示,重组水蛭素蛋白存在10个半胱氨酸,共形成5对二硫键,分别为Ṩ1(Cys1-Cys2)、Ṩ2-Ṩ3(Cys3-Cys5/Cys4-Cys6或Cys3-Cys6/Cys4-Cys5)、Ṩ4(Cys7-Cys9)和Ṩ5(Cys8-Cys10)。

主 题 词：UPLC Q-TOF高分辨质谱 二硫键 蛋白类药物 联合酶解 

学科分类：081703[081703] 081704[081704] 07[理学] 08[工学] 0817[工学-轻工类] 070302[070302] 0703[理学-化学类] 0836[0836] 

核心收录：

D　O　I：10.16522/j.cnki.cjph.2023.11.013

馆 藏 号：203125159...