长角血蜱谷胱甘肽过氧化物酶的克隆与原核表达(英文)

作     者：张超颖 郭果为 王正朝 黄晓红 ZHANG Chao-ying;GUO Guo-wei;WANG Zheng-chao;HUANG Xiao-hong

作者机构：福建师范大学生命科学学院生物化学与分子生物学专业福州350108 福建省发育与神经生物学重点实验室福州350108 

基　　金：Supported by the Innovative Research Project for Undergraduates from College of Life Science,Fujian Normal University(No.02011520) the Natural Science Foundation of Fujian Province(No.2010J01145 and No.2008J0004) the Natural Science Foundation of China(No.31101032 and No.31040084) 

出 版 物：《中国人兽共患病学报》 (Chinese Journal of Zoonoses)

年 卷 期：2012年第28卷第9期

页      码：861-868页

摘      要：目的长角血蜱(Hemaphysalis longicornis)不仅吸食家畜血甚至人血,还是多种疾病的传播媒介,对该蜱的研究具有重要的医学和兽医学意义。在大肠杆菌中表达长角血蜱的谷胱甘肽过氧化物酶(glutathione peroxidase)(HlGPx),为该酶在长角血蜱中的生理作用研究奠定基础,为该病媒的免疫防控提供参考。方法根据长角血蜱EST文库提示的片段序列的信息,设计引物采用PCR方法从长角血蜱成蜱的cDNA中扩增谷胱甘肽过氧化物酶基因。利用定点突变将该基因编码序列中一个编码硒半胱氨酸的密码子TGA突变为通用半胱氨酸密码子TGC,与表达载体pGEX-4T-1重组,转化BL21(DE3)pLysS,IPTG诱导表达,SDS-PAGE及免疫印迹分析。结果成功获得了长角血蜱谷胱甘肽过氧化物酶全长序列,突变后在大肠杆菌中诱导表达了约51kDa的重组蛋白,Western-blot显示表达产物与抗GST抗体有很强的交叉反应。结论突变的HlGPx可以在大肠杆菌中表达并可用于下一步制备免疫血清及功能分析。

主 题 词：长角血蜱 谷胱甘肽过氧化物酶 生物信息学分析 克隆 定点突变 原核表达 Western印迹 

学科分类：090601[090601] 09[农学] 0906[农学-水产类] 

核心收录：

D　O　I：10.3969/cjz.j.issn.1002-2694.2012.09.001

馆 藏 号：203125375...