荧光实时定量RT-PCR观察伤寒杆菌鞭毛z66和d/j抗原基因表达方法的建立

作     者：徐顺高 黄新祥 周丽萍 XU Shun-gao;HUANG Xin-xiang;ZHOU Li-ping

作者机构：江苏大学医学技术学院江苏镇江212001 

基　　金：江苏大学高级专业人才科研启动基金资助 

出 版 物：《江苏大学学报（医学版）》 (Journal of Jiangsu University：Medicine Edition)

年 卷 期：2005年第15卷第1期

页      码：21-24页

摘      要：目的:构建荧光实时定量RT-PCR测定伤寒杆菌鞭毛抗原z66和d/j编码基因mRNA的方法。方法:根据伤寒杆菌鞭毛抗原z66和d/j编码基因序列,设计引物扩增其读码框架内片段,克隆进pGEM-TEasy质粒。质粒经PCR鉴定后,纯化并定量,作为荧光实时定量PCR的标准品,并制作标准曲线。利用不同渗透压下的鞭毛素基因表达差异,比较三种随机引物(6、8、10核苷酸)与特异性引物的逆转录效果,以确定一种最佳的随机引物用于多基因表达观察。结果:标准曲线有较好的线性(r=0.999),cDNA和标准品的PCR产物溶解曲线峰值一致。用8核苷酸随机引物进行逆转录的敏感度高于6、10核苷酸随机引物,低于特异性引物,但用其观测z66抗原基因和d/j抗原基因在高、低渗时表达变化趋势与用特异性引物测得结果一致。结论:成功构建用8核苷酸随机引物进行逆转录同时测定伤寒杆菌鞭毛抗原z66和d/j基因表达的荧光实时定量RT-PCR方法。

主 题 词：实时荧光定量RT-PCR 伤寒杆菌 随机引物 

学科分类：1001[医学-基础医学] 10[医学] 

D　O　I：10.3969/j.issn.1671-7783.2005.01.007

馆 藏 号：203125441...