烟草四种重要土传病原菌多重PCR检测方法的建立与应用

作     者：王荣波 叶劲松 吴平 刘裴清 林伟 李本金 WANG Rongbo;YE Jinsong;WU Ping;LIU Peiqing;LIN Wei;LI Benjin

作者机构：福建省农业科学院植物保护研究所福建省作物有害生物监测与治理重点实验室福州350013 福建省烟草公司南平市公司南平353000 

基　　金：福建省烟草公司南平市公司科技项目(2022350700240100) 福建省农业科学院科技创新平台专项(CXPT202105) 福建省农业科学院东西部协作项目(DKBF-2022-16) 福建省农业科学院"5511"协同创新工程(XTCXGC2021011、XTCXGC2021017) 

出 版 物：《植物病理学报》 (Acta Phytopathologica Sinica)

年 卷 期：2023年第53卷第6期

页      码：1208-1221页

摘      要：为快速准确地鉴定和区分烟草生产中的4种土传病害病原菌-青枯雷尔氏菌(Ralstonia solanacearum)、软腐果胶杆菌(Pectobacterium carotovorum)、寄生疫霉(Phytophthora parasitica)和尖孢镰刀菌(Fusarium oxysporum),通过设计和筛选特异性引物,建立多重PCR反应体系,并对体系中的引物用量和退火温度进行优化,检测优化后体系的特异性和灵敏度,验证其在烟草组织、土壤样品及种子样本中病原菌检测的实用性。结果表明,反应体系中最优的引物用量组合为RsRipNTF3/RsRipNTR3各0.9μL、PccTF4/PccTR4各0.6μL、PpRhTF1/PpRhTR1各1.2μL和FoP450TF1/FoP450TR1各0.8μL,最佳退火温度为61.1℃。该体系可分别扩增出4种病原菌的特异性片段,大小分别为511、361、669和840 bp,对病原菌DNA的检测灵敏度可达50 pg·μL^(-1)。植物组织和土壤样本检测结果表明,所建立的多重PCR检测方法能够准确地检测出其中的病原菌;采用该检测方法对80份烟草商品种进行检测,发现其中4个样本携带有青枯雷尔氏菌或尖孢镰刀菌,而未检测到软腐果胶杆菌和寄生疫霉。本研究建立的多重PCR检测方法可以灵敏、准确、高通量检测4种烟草土传病原菌,为烟草土传病害的准确诊断和早期防控提供可靠的技术方法。

主 题 词：烟草 土传病害 多重PCR 分子检测 

学科分类：09[农学] 0904[农学-动物医学类] 090401[090401] 

核心收录：

D　O　I：10.13926/j.cnki.apps.000889

馆 藏 号：203125447...