基于识别重叠序列特性的限制性内切酶的重组表达策略研究

作     者：王睿君 龚雪梅 王欣竹 叶佳琪 李梦磊 张坤晓 WANG Ruijun;GONG Xuemei;WANG Xinzhu;YE Jiaqi;LI Menglei;ZHANG Kunxiao

作者机构：江苏海洋大学药学院江苏连云港222005 江苏海洋大学江苏省海洋药物活性分子筛选重点实验室江苏连云港222005 

基　　金：国家自然科学基金青年基金项目(31601191) 

出 版 物：《食品与生物技术学报》 (Journal of Food Science and Biotechnology)

年 卷 期：2023年第42卷第12期

页      码：82-89页

摘      要：甲基转移酶可以保护宿主基因组DNA免受限制性内切酶的消化,根据这一特性,经典的限制性内切酶制备策略是首先通过表达与其配对的甲基转移酶来保护宿主菌株,然后再共表达限制性内切酶,即“一对一”的重组表达模式。作者设计了一个新的策略:通过共表达识别重叠序列的甲基转移酶来保护宿主菌株,以制备限制性内切酶。首先将识别重叠序列的甲基转移酶转入大肠杆菌ER2566,以保护宿主基因组DNA,然后将能识别重叠序列的多个限制性内切酶分别转入该宿主菌株,以进行限制性内切酶的重组表达,即“一对多”的重组表达模式。根据这一方法,利用甲基转移酶*** Dix5 I、*** I和*** I实现了识别重叠序列(TTAA、AGCT和GCGC)的一系列限制性内切酶的重组表达,还利用甲基转移酶*** I成功实现了两个新的*** I同裂酶*** SP4ORF25090P和***5ORF28P的重组表达。该方法简化了对抵抗限制性内切酶消化的宿主菌株的大量筛选工作,并提供了大规模制备限制性内切酶的能力。这一方法也可用于发现其他微生物中新的同工酶或同裂酶。

主 题 词：限制性内切酶 甲基转移酶 重叠序列 同裂酶 同工酶 

学科分类：0710[理学-生物科学类] 07[理学] 08[工学] 09[农学] 071007[071007] 0901[农学-植物生产类] 0836[0836] 090102[090102] 

D　O　I：10.12441/spyswjs.20211224002

馆 藏 号：203125477...