牛诺瓦病毒和牛轮状病毒双重RAA-LFD快速检测方法的建立及应用

作     者：李惠惠 董可儿 刘馨博 张春晓 马超 陈利苹 钟旗 姚刚 马雪连 LI Huihui;DONG Keer;LIU Xinbo;ZHANG Chunxiao;MA Chao;CHEN Liping;ZHONG Qi;YAO Gang;MA Xuelian

作者机构：新疆农业大学动物医学学院乌鲁木齐830052 动物保健与畜产品质量安全研究实验室乌鲁木齐830052 乌鲁木齐市动物园乌鲁木齐830001 深圳市真瑞生物有限公司深圳518000 新疆畜牧科学院兽医研究所乌鲁木齐830000 

基　　金：国家自然科学基金(32002251) 肉生高效健康饲养技术集成研究与示范(2021A02003-1) 

出 版 物：《畜牧兽医学报》 (ACTA VETERINARIA ET ZOOTECHNICA SINICA)

年 卷 期：2024年第55卷第1期

页      码：406-412页

摘      要：为建立能同时检测牛诺瓦病毒(bovine norovirus,BNoV)和牛轮状病毒(bovine rotavirus,BRV)的重组酶辅助扩增-侧流层析试纸条(recombinase aided amplification-lateral flow dipstick,RAA-LFD)快速检测方法。本试验按照RAA引物探针设计原则,分别针对BNoV RdRp基因和BRV VP7基因的保守区设计引物和探针,制备标准重组质粒,建立并优化RAA-LFD反应体系,同时对该检测方法进行特异性、敏感性及重复性评估,用建立的RAA-LFD法与PCR法、qPCR法分别对采集的168份腹泻犊牛的临床样本进行平行检测。结果显示,该方法可在20 min,39℃的条件下扩增目标片段,对BNoV和BRV敏感度均为103 copies·μL^(-1),与PCR的检测结果基本一致,且与牛冠状病毒(bovine coronavirus,BCoV)、牛病毒性腹泻病毒(bovine viral diarrhea virus,BVDV)和牛传染性鼻气管炎病毒(infectious bovine rhinotracheitis virus,IBRV)无交叉反应,虽低于qPCR检测结果,但可通过肉眼直接观察试纸条的检测结果。综上所述,RAA-LFD法灵敏度较高、且简便、快速、同时不依赖于仪器、专业操作人员,适用于现场检测。

主 题 词：牛诺瓦病毒 牛轮状病毒 重组酶介导扩增 侧向流试纸条 

学科分类：090601[090601] 09[农学] 0906[农学-水产类] 

核心收录：

D　O　I：10.11843/j.issn.0366-6964.2024.01.039

馆 藏 号：203125509...