周期型马来丝虫半胱氨酸蛋白酶基因原核和真核表达质粒的构建

作     者：方政 黄为群 陈阳 谢东方 姜声扬 吴建军 FANG Zheng;HUANG Wei-qun;CHEN Yang;XIE Dong-fang;JIANG Sheng-yang;WU Jian-jun

作者机构：南通大学医学院寄生虫学教研室226001 

基　　金：江苏省教育厅自然科学研究计划项目(04KJD310136) 

出 版 物：《中国地方病学杂志》 (Chinese Jouranl of Endemiology)

年 卷 期：2007年第26卷第6期

页      码：639-642页

摘      要：目的构建我国流行的周期型马来丝虫半胱氨酸蛋白酶(BmCP)基因原核和真核表达质粒,为进一步研究奠定基础。方法从周期型马来丝虫虫体中提取总RNA,反转录成cDNA,设计合成引物,以cDNA为模板,通过PCR从cDNA中扩增出目的基因,扩增产物经初步鉴定后将其克隆人pMD18-T载体.进行双酶切及PCR扩增鉴定,获得阳性重组质粒,进行测序分析和同源性比较。阳性克隆的质粒亚克隆至真核表达质粒pcDNA3.1(+).转化感受态大肠埃希菌(***)DH5α,筛选阳性克隆,用PCR和双酶切鉴定阳性重组子。结果RT-PCR扩增出1条约1201 bp的特异性条带,重组质粒双酶切和以质粒为模板的PCR结果与预期相符,DNA序列分析与GenBank已知的基因序列同源性为99%。构建了真核重组表达质粒peDNA3.1-BmCP。结论成功构建了周期型BmCP原核和真核重组表达质粒,为进一步研究该基因的功能提供了条件。

主 题 词：马来丝虫 半胱氨酸蛋白酶 基因 原核表达 真核表达 质粒 

学科分类：1001[医学-基础医学] 100103[100103] 10[医学] 

D　O　I：10.3760/cma.j.issn.1000-4955.2007.06.015

馆 藏 号：203125522...