PAX2小干扰RNA在UUO大鼠体内的筛选与鉴定

作     者：李丽 王长山 吴玉斌 LI Li;WANG Chang-shan;WU YU-bin

作者机构：佳木斯大学附属第一医院儿科佳木斯医学博士154002 佳木斯大学基础医学院生物教研室佳木斯154007 中国医科大学附属盛京医院肾内科沈阳110004 

基　　金：黑龙江省教育厅科学技术研究项目(12511536) 

出 版 物：《医学研究生学报》 (Journal of Medical Postgraduates)

年 卷 期：2012年第25卷第7期

页      码：678-684页

摘      要：目的梗阻性肾病是由于泌尿道机构和(或)功能改变,阻碍尿液的排出,导致肾实质病理和功能损害的临床综合征。病理学特征主要表现为肾小管萎缩和间质纤维化。文中通过RNA干扰(RNA interference,RNAi)技术,筛选及鉴定有效抑制肾间质纤维化大鼠肾组织PAX2基因表达的小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)序列。方法制作单侧输尿管结扎(unilateral ureteral obstruction,UUO)模型,光镜下观察肾组织病理形态学变化;针对大鼠PAX2 mRNA序列全长(mRNA:NM_001106361),设计合成4对siRNA干扰序列和阴性对照序列,为了观察体内转染同时合成FAM标记的阴性对照,以invivo jetPEI体内转染试剂为载体转染至UUO大鼠肾被膜下,利用实时荧光定量PCR及Western blot技术检测肾组织PAX2 mRNA及蛋白表达。结果通过HE和Masson染色观察到UUO模型3 d后肾纤维化表现;UUO模型转染3 d后,荧光显微镜观察到肾小管周围存在绿色荧光,4对干扰序列均有不同程度的抑制肾皮质PAX2 mRNA及蛋白的表达,其中siRNA3位点对PAX2干扰效果最强,mRNA及蛋白抑制分别达到55%和81%。结论成功筛选出1对有效抑制肾间质纤维化大鼠肾小管上皮细胞PAX2表达siRNA,为深入研究肾纤维化的发病机制提供新的手段。

主 题 词：小干扰RNA 单侧输尿管结扎 PAX2 肾间质纤维化 

学科分类：0710[理学-生物科学类] 071010[071010] 081704[081704] 07[理学] 08[工学] 0817[工学-轻工类] 

D　O　I：10.3969/j.issn.1008-8199.2012.07.002

馆 藏 号：203125532...