COL1A1-shRNA表达载体的构建及对胃癌细胞增殖迁移的影响

作     者：李爱清 姒健敏 商燕 甘丽红 郭磊 周天华 LI Ai-qing;SI Jian-min;SHANG Yan;GAN Li-hong;GUO Lei;ZHOU Tian-hua

作者机构：浙江大学邵逸夫临床医学研究所胃肠病实验室浙江杭州310016 浙江大学医学院疾病模拟中心浙江杭州310058 

基　　金：国家高技术研究发展计划(863计划)项目资助(N20060102Z4055) 

出 版 物：《浙江大学学报（医学版）》 (Journal of Zhejiang University(Medical Sciences))

年 卷 期：2010年第39卷第3期

页      码：257-263页

摘      要：目的:构建COL1A1特异小干扰RNA(siRNA)表达载体,体外评价其对胃癌细胞BGC-823增殖迁移的影响。方法:根据文献获得3个COL1A1的siRNA靶序列,设计能转录短发夹状RNA(short hairpin RNAs,shRNA)的DNA序列,并与pSilencerTM4.1-CMV neo线性质粒载体连接,连接产物转化感受态大肠杆菌DH5α,筛选获得重组质粒;经DNA测序鉴定重组体DNA序列正确后转染胃癌BGC-823细胞,利用G418筛选稳定表达COL1A1-shRNA的BGC-823细胞株。通过实时荧光定量RT-PCR及Western blot检测转染后细胞COL1A1在mRNA及蛋白质水平的表达;MTT法及Transwell法检测COL1A1干扰后胃癌细胞增殖及迁移能力的变化。结果:序列测定表明成功构建3个COL1A1-shRNA表达载体。实时荧光定量RT-PCR及Western blot检测显示,COL1A1-shRNA转染胃癌BGC-823细胞的COL1A1 mRNA及蛋白表达水平明显降低(P<0.05);MTT试验及Transwell迁移试验显示,转染后细胞增殖及迁移能力明显降低(P<0.05)。结论:COL1A1-shRNA转染胃癌BGC-823细胞能有效抑制细胞COL1A1的表达及癌细胞的增殖迁移。

主 题 词：胃肿瘤/病理学 胶原Ⅰ型/遗传学 RNA干扰 受体,CXCR4遗/传学 转录,遗传 遗传载体 

学科分类：1002[医学-临床医学类] 100214[100214] 10[医学] 

D　O　I：10.3785/j.issn.1008-9292.2010.03.008

馆 藏 号：203125627...