应用不同表达载体表达欧洲型PRRSV ORF5蛋白的研究

作     者：孙文超 任静强 温树波 赵权 阎富龙 刘昊 陆飞 靖杰 鲁会军 金宁一 

作者机构：吉林农业大学动物科技学院吉林长春130118 军事医学科学院军事兽医研究所吉林长春130122 吉林大学畜牧兽医学院吉林长春130062 

基　　金：科技部"863"项目(No.2011AA10A208) 吉林省科技发展计划重点资助项目(No.20090235) 

出 版 物：《中国病原生物学杂志》 (Journal of Pathogen Biology)

年 卷 期：2013年第8卷第11期

页      码：961-965页

摘      要：目的构建多种欧洲型PRRSV GP5蛋白原核表达载体,并比较其在大肠埃希菌中的表达效率。方法参考GenBank发表的欧洲型PRRSV LV株(GenBank登录号:M96262)ORF5序列,通过序列分析,设计合成ORF5全基因序列扩增引物及信号肽缺失引物。构建原核表达质粒pET-28a-GP5、pET-28a-gGP5、pET-22b-GP5、pET-22b-gGP5、pET-32a-GP5、pET-32a-gGP5、pGEX-4T-GP5、pGEX-4T-gGP5,经IPTG诱导后采用SDS-PAGE电泳分析GP5蛋白在各个原核表达载体的表达情况。结果 pET-28a-gGP5、pET-22b-gGP5、pET-32a-gGP5均没有高效的表达出缺失信号肽的GP5蛋白,缺少信号肽的GP5蛋白在pGEX-4T-1载体中高效表达,目的蛋白分子质量单位为42ku,与理论值相符。没有缺失信号肽的GP5蛋白在pET-28a-GP5、pET-22b-GP5、pET-32a-GP5、pGEX-4T-GP5,均未得到高效表达。结论本实验构建的重组原核表达载体pGEX-4T-gGP5能在大肠埃希菌中高效表达欧洲型PRRSV GP5蛋白,为进一步分析该蛋白的抗原性奠定了基础。

主 题 词：欧洲型PRRSV GP5蛋白 原核表达 信号肽 

学科分类：090601[090601] 09[农学] 0906[农学-水产类] 

D　O　I：10.13350/j.cjpb.2013.11.001

馆 藏 号：203125787...