结核分枝杆菌CFP10-ESAT6-Rv3425基因片段融合蛋白的表达与纯化

作     者：吴兴福 孙战强 徐明 WU Xing-fu;SUN Zhan-qiang;XU Ming

作者机构：苏州市第五人民医院检验科江苏苏州215007 无锡博慧斯生物医药科技有限公司江苏无锡214084 江苏省寄生虫病防治研究所江苏无锡214064 

基　　金：国家科技重大专项(NO.2008ZX10003003) 

出 版 物：《临床肺科杂志》 (Journal of Clinical Pulmonary Medicine)

年 卷 期：2011年第16卷第10期

页      码：1533-1535页

摘      要：目的克隆表达结核分枝杆菌CFP10-ESAT6-Rv3425基因片段融合蛋白并纯化,测抗原的免疫原性,为结核病的临床诊断提供有效的候选抗原。方法利用生物信息学分析免疫优势位点,设计不同引物,采用聚合酶链反应(PolymeraseChain Reaction,PCR)扩增出相应基因片段,插入pET30a表达载体,转入大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导表达目的蛋白,亲和纯化后用H37Rv免疫的兔血清进行间接酶联免疫吸附试验(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)测定其免疫原性。结果 PCR扩增的CFP10、ESAT6和Rv33425基因片段与基因文库(Genbank)报道的完全一致。三者在大肠杆菌BL21(DE3)中融合表达的产物约为22kDa,与预计大小相吻合。Ni-NTA亲和纯化出目的蛋白。ELISA显示该蛋白具有较强的免疫原性。结论结核分枝杆菌CFP10-ESAT6-Rv3425融合基因片段的融合表达纯化后,可作为结核病免疫诊断的一个候选抗原。

主 题 词：分枝杆菌 结核 Rv3425 CFP10 ESAT6 

学科分类：1001[医学-基础医学] 10[医学] 

D　O　I：10.3969/j.issn.1009-6663.2011.10.025

馆 藏 号：203125824...