基于催化发夹自组装技术的新型冠状病毒靶RNA快速荧光检测法的建立

作     者：方楚斌 唐田 周琛 张婧 林华 朱娅岚 杨加雪 汪川 FANG Chubin;TANG tian;ZHOU Chen;ZHANG Jing;LIN Hua;ZHU Yalan;YANG Jiaxue;WANG Chuan

作者机构：四川大学华西公共卫生学院/四川大学华西第四医院成都610041 成都海关技术中心成都610041 

基　　金：成都市科学技术局重大科技应用示范项目(No.2022-YF09-00011-SN) 四川省科学技术厅重点研发项目(No.2021YFS0005、No.2021YFS0179、No.2022YFS0513) 国家自然科学基金(No.82304196)资助 

出 版 物：《四川大学学报（医学版）》 (Journal of Sichuan University(Medical Sciences))

年 卷 期：2024年第55卷第1期

页      码：183-189页

摘      要：目的建立一种基于催化发夹自组装技术(catalytic hairpin assembly,CHA)的新型冠状病毒(简称新冠病毒)靶RNA荧光检测法,实现对新冠病毒核酸的快速检测。方法根据CHA反应原理,选择新冠病毒核衣壳蛋白基因(N基因,NC_045512.2)上长24 nt的片段作为检测靶点(即靶RNA),设计合成发夹探针H1、H2,并在探针H1上修饰荧光基团和猝灭基团;在室温(25℃)下,向探针溶液中加入靶RNA引发CHA反应,通过检测反应过程中荧光强度的变化实现对靶RNA的快速检测;优化检测探针及反应条件,对方法的灵敏度和特异性进行评价。结果成功建立了针对新冠病毒靶RNA的荧光CHA法,可于室温下在30 min内完成检测,该法除具有优良的特异性、可准确区分靶RNA和发生单碱基突变的靶RNA之外,还具有良好的灵敏度,检出限为50 pmol/L。结论本研究所提出的方法实现了对新冠病毒靶RNA简单快速的检测,具有优良的特异性和灵敏度,有望通过进一步优化以用于临床新冠病毒核酸样本的快速检测。

主 题 词：新型冠状病毒 核酸检测 催化发夹自组装 荧光 

学科分类：1010[医学-医学技术类] 10[医学] 

核心收录：

D　O　I：10.12182/20240160601

馆 藏 号：203125843...