基于ompK36突变快速检测产KPC肺炎克雷伯菌亚胺培南最低抑菌浓度的方法学建立

作     者：赵芯米 黄桂英 丁卉 赵赟安 陈娇丽 黄飞武 陈秀英 黄建胜 Zhao Xinmi;Huang Guiying;Ding Hui;Zhao Yunan;Chen Jiaoli;Huang Feiwu;Chen Xiuying;Huang Jiansheng

作者机构：温州医科大学附属第五医院/丽水市中心医院、浙江省影像诊断与介入微创研究重点实验室丽水323000 丽水市疾病预防控制中心丽水323000 

基　　金：浙江省自然科学基金联合基金(LHDMZ23H190001) 浙江省医药卫生科技计划(2022RC086,2023XY249) 丽水市科技计划(2021GYX17,2022SJZC008) 

出 版 物：《中华检验医学杂志》 (Chinese Journal of Laboratory Medicine)

年 卷 期：2024年第47卷第2期

页      码：176-183页

摘      要：目的基于ompK36基因GD突变,建立一种快速检测产肺炎克雷伯菌碳青霉烯酶的肺炎克雷伯菌(KPC-Kp)亚胺培南最低抑菌浓度(MIC)的方法。方法方法学建立。收集丽水市中心医院2011年3月至2019年12月的非重复肺炎克雷伯菌258株,PCR扩增膜孔蛋白o mpK36基因以及碳青霉烯酶基因bla_(KPC)、bla_(NDM)、bla_(IMP)、bla_(OXA-48)并测序确认,微量肉汤稀释法检测菌株亚胺培南MIC值,建立基因型与MIC值的对应模式。基于该模式,设计建立实时荧光聚合酶链反应(RT-PCR)快速检测MIC值的方法。利用丽水市疾控中心2017—2019年收集的159株非重复肺炎克雷伯菌进一步验证。四格表计算敏感度、特异度,Kappa检验比较RT-PCR法与肉汤稀释法结果的一致性。结果258株肺炎克雷伯菌中,109株未携带碳青霉烯酶基因,65株携带ompK36基因GD突变,127株携带bla_(KPC),15株携带bla_(NDM),9株携带bla_(IMP),未检测到bla_(OXA-48)。以肉汤稀释法为标准,肺炎克雷伯菌耐药基因与亚胺培南MIC值存在3种对应模式:4种碳青霉烯酶基因均阴性时,MIC≤1 mg/L,敏感度为100%(107/107),特异度为98.4%(125/127);bla_(KPC)阳性而ompK36基因GD突变阴性时,4 mg/L≤MIC≤16 mg/L,敏感度为88.2%(60/68),特异度为98.8%(164/166);bla_(KPC)和ompK36基因GD突变双阳性时,MIC≥32 mg/L,敏感度为96.6%(57/59),特异度为96.6%(169/175)。RT-PCR法可准确检测bla_(KPC)、bla_(NDM)、bla_(IMP)、bla_(OXA-48)基因;在产酶菌株中o mpK36基因GD突变的RT-PCR结果与测序法100%一致。以丽水市疾控中心来源的159株肺炎克雷伯菌为样本,以肉汤稀释法为参照,RT-PCR检测亚胺培南MIC值在3种模式下敏感度和特异度均大于95%,Kappa值为0.971。结论基于ompK36基因GD突变建立的RT-PCR法有助于快速判断KPC-Kp的亚胺培南MIC值范围。

主 题 词：克雷伯菌,肺炎 亚胺培南 最低抑菌浓度 基因突变 分子检测 

学科分类：1010[医学-医学技术类] 10[医学] 

核心收录：

D　O　I：10.3760/cma.j.cn114452-20231014-00209

馆 藏 号：203125845...