通过CRISPR-Cas9系统敲减PAEC中GGTA1和CMAH基因的效果检测

作     者：牟丽莎 白图雅 谢崇伟 蔡志明 MOU Li-sha;BAI Tu-ya;XIE Chong-wei;CAI Zhi-ming

作者机构：深圳市第二人民医院深圳大学第一附属医院深圳市驯化器官医学工程技术研究开发中心广东深圳518035 

基　　金：国家自然科学基金(81200465) 深圳市"三名"工程(驯化器官)项目(2015) 

出 版 物：《深圳中西医结合杂志》 (Shenzhen Journal of Integrated Traditional Chinese and Western Medicine)

年 卷 期：2015年第25卷第22期

页      码：1-3,F0003页

摘      要：目的:检测由短回文重复序列(CRISPR)-Cas9系统敲减猪动脉内皮细胞(PAEC)中基因α1,3半乳糖基转移酶(GGTA1)和CMP-N-乙酰神经氨酸羟化酶(CMAH)的效果。方法:通过CRISPR-Cas9系统,用已设计好的GGTA1和CMAH基因的guide RNA(g RNA)构建质粒,以慢病毒为载体包装病毒和感染PAEC,对成功感染的细胞进行单克隆培养并挑选收集单克隆细胞,提取细胞基因组,进行PCR,琼脂糖凝胶电泳,退火、酶切,测序等方法对GGTA1和CMAH基因敲减的效果进行检测。结果:对单克隆细胞进行选择性测序,选择V2-g-a1、V2-c-b1、V2-c-d4单克隆细胞测序结果分别为:V2-g-a1细胞基因组突变位点在第205位;V2-c-b1细胞基因组突变位点在第240位;V2-c-d4细胞基因组突变位点在第246位。结论:CRISPR-Cas9系统成功构建质粒,完成慢病毒包装和感染细胞,成功敲减目的基因。

主 题 词：GGTA1 CMAH CRISPR-Cas9 PAEC 单克隆细胞 

学科分类：0710[理学-生物科学类] 07[理学] 071007[071007] 10[医学] 

D　O　I：10.16458/j.cnki.1007-0893.2015.22.001

馆 藏 号：203125887...