敲减NLRP3抑制LPS诱导BV2小胶质细胞的炎症反应

作     者：徐鑫梓 王睿 杜雅明 刘欣 邵卫 陈国华 王俊力 Xu Xinzi;Wang Rui;Du Yaming

作者机构：华中科技大学同济医学院附属武汉中西医结合医院神经内科武汉430022 湖北中医药大学中医临床学院武汉430065 

基　　金：国家自然科学基金资助项目(No.81673914) 武汉市卫生健康委青年项目(No.WZ21Q08) 武汉市科技局知识创新专项曙光项目(No.2022020801020527) 

出 版 物：《华中科技大学学报（医学版）》 (Acta Medicinae Universitatis Scientiae et Technologiae Huazhong)

年 卷 期：2024年第53卷第1期

页      码：1-5页

摘      要：目的 评价NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3(NLRP3)对脂多糖(LPS)诱导的BV2小胶质细胞活化的影响及意义。方法 设计shRNA质粒转染BV2小胶质细胞敲减NLRP3表达,应用qRT-PCR和蛋白质免疫印迹实验挑选转染效率最高序列。运用蛋白免疫印迹法检测细胞系中NLRP3表达情况;光镜下观察NLRP3-shRNA(shNLRP3)转染对细胞系形态学的影响,酶联免疫吸附法(ELISA)检测细胞培养上清液炎症因子IL-18、IL-1β、TNF-α水平,免疫荧光染色观察小胶质细胞活化标志蛋白iNOS、Arg-1、Iba1表达。结果 NLRP3在LPS诱导的BV2细胞中高表达。NLRP3-mus-727组mRNA表达最低,沉默效果最好,蛋白免疫印迹结果显示细胞转染成功。光镜观察显示转染shNLRP3的BV2细胞系在LPS刺激后呈圆形、短梭形,与空白对照组静息态细胞相似。ELISA检测到转染shNLRP3的BV2细胞系在LPS刺激后促炎性介质IL-18、IL-1β、TNF-α和NO含量较阴性对照组(转染NC shRNA后给予LPS刺激)下降(均P<0.05);免疫荧光染色观察到转染shNLRP3的细胞系在LPS刺激后iNOS/Iba1相对表达量较阴性对照组下降,Arg-1/Iba1上调。结论 LPS诱导的BV2细胞系中NLRP3高表达,抑制NLRP3表达能够抑制LPS诱导的BV2细胞炎症反应,促使其向M2表型极化。

主 题 词：小胶质细胞 NLRP3炎性小体 shRNA 

学科分类：1002[医学-临床医学类] 100204[100204] 10[医学] 

D　O　I：10.3870/j.issn.1672-0741.23.09.009

馆 藏 号：203125907...