羊布鲁氏菌omp25基因原核表达载体的构建与鉴定

作     者：石艳春 韩堃 郑源强 吴岩 毕力夫 

作者机构：内蒙古医学院基础医学院内蒙古呼和浩特010059 天津医科大学基础医学研究中心 

基　　金：教育部"春晖计划"(Z2007-1-01001 Z2007-1-01004) 内蒙古自然科学基金(2009MS1102) 内蒙古自治区科技计划项目(20080502) 内蒙古自治区人才开发基金 

出 版 物：《内蒙古医学院学报》 (Acta Academiae Medicinae Neimongol)

年 卷 期：2012年第34卷第2期

页      码：89-93页

摘      要：目的:利用PCR反应从羊布鲁氏菌基因组DNA中克隆omp25基因,并将其构建到原核表达载体pET-32a中。方法:试剂盒法提取羊布鲁氏菌基因组DNA,设计合适的引物,通过PCR反应从基因组中扩增外膜蛋白OMP25的编码基因(omp25)。将得到的基因片段连接到克隆载体pMD19-T的多克隆位点(MCS)中,将连接体pMD19-T-omp25转化感受态大肠杆菌DH5(并进行筛选和克隆扩增,提取质粒并进行酶切分析与序列测定。利用酶切与连接反应将目的基因(omp25)插入载体pET-32a的多克隆位点中,将连接体pET-32a-omp25转化感受态大肠杆菌DH5(并进行筛选和克隆扩增,提取质粒并进行酶切分析。结果:PCR扩增得到的基因片段与GenBank中已公布的羊布鲁氏菌omp25基因同源性为99%。酶切分析结果表明,omp25基因成功地插入载体pET-32a中。结论:成功地扩增得到了羊布鲁氏菌omp25基因并构建了携带该基因的重组原核表达载体pET-32a-omp25,为后续的研究提供了可靠的基础。

主 题 词：羊布鲁氏菌 omp25 原核表达载体 克隆 鉴定 

学科分类：1001[医学-基础医学] 100102[100102] 10[医学] 

D　O　I：10.3969/j.issn.1004-2113.2012.02.001

馆 藏 号：203126057...